根皮素對人γбT細(xì)胞殺傷結(jié)腸癌SW-1116細(xì)胞的影響及其機制的探討.pdf

1、目的：探討根皮素對人γδT細(xì)胞殺傷結(jié)腸癌SW-1116細(xì)胞的影響及其機制。
　　 方法：人外周血200ml離心分離，將外周血單個核細(xì)胞(PBMC)放入含2ug/ml異戊烯焦磷酸(IPP)的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)10天，同時將不同濃度的根皮素作用于γδT細(xì)胞及結(jié)腸癌SW-1116細(xì)胞24、48及72h后，MTT法檢測γδT細(xì)胞及SW-1116細(xì)胞的生長；FCM檢測根皮素作用48h后的γδT細(xì)胞PFP、GraB及CD107a的

2、表達；LDH釋放法檢測根皮素作用48h后，γδT細(xì)胞對結(jié)腸癌SW-1116細(xì)胞的殺傷活性；western blot法檢測不同濃度根皮素作用48h后，γδT細(xì)胞中Wnt3a的表達。
　　 結(jié)果：IPP作用10天后，γδT細(xì)胞的比例由3.12％增加到79.6％。MTT結(jié)果顯示，與對照組比較，濃度2.35～18.75ug/ml的根皮素作用后，γδT細(xì)胞的增殖率顯著提高(P＜0.05)，當(dāng)根皮素濃度超過18.75μg/ml時，γδT細(xì)胞

3、的增殖率逐漸下降，超過75μg/ml時，根皮素對γδT細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用(P＜0.05)。濃度0.59～75μg/ml的根皮素作用后，SW-1116細(xì)胞的生長抑制率逐漸上升，但與對照組比較無顯著差異（P＞0.05），根皮素濃度超過75μg/ml時，SW-1116細(xì)胞的生長抑制率較對照組顯著增高(P＜0.05)。FCM檢測結(jié)果顯示，不同濃度根皮素作用48h后，γδT細(xì)胞GraB、PFP及CD107a的表達較對照組均顯著增加，差異顯著(P＜

4、0.05)。LDH釋放法檢測結(jié)果顯示，根皮素作用48h后，γδT細(xì)胞對結(jié)腸癌SW-1116細(xì)胞的殺傷活性隨根皮素濃度的逐漸增加而逐漸增強，濃度37.5μg/ml時殺傷活性達最高峰(89％)，當(dāng)藥物濃度超過37.5μg/ml時，殺傷活性略有下降，各實驗組與對照組(38.3％)比較差異顯著(P＜0.05)，且各實驗組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。相關(guān)分析表明，CD107a的表達與PFP、GraB及殺傷活性顯著相關(guān)（P＜0.05）。

5、western blot檢測結(jié)果顯示，不同濃度根皮素作用48h后，γδT細(xì)胞中Wnt3a蛋白的表達存在差異，灰度值分析結(jié)果顯示，各實驗組灰度值均顯著高于對照組（P＜0.05），根皮素濃度18.75μg/ml組灰度值最高(87011.9)，75μg/ml濃度組灰度值最低(40521.14)，各濃度組間差異顯著（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：適當(dāng)濃度的根皮素能夠促進γδT細(xì)胞的增殖；高濃度的根皮素能夠抑制結(jié)腸癌SW-1116細(xì)胞的生