川楝素對人腸癌SW480細胞的抑制作用及其作用機制的探討.pdf

1、研究目的:本實驗旨在探討川楝素對人腸癌SW480細胞的抑制作用及相關(guān)分子機制;
　　研究方法:采用MTT比色法，觀察不同濃度的川楝素分別作用人腸癌細胞株SW480不同時間后增殖的影響;AnnexinⅤ/PI雙染色法——使用流式細胞儀，檢測川楝素對人腸癌細胞株SW480凋亡的影響;Hoechst33342染色法——應用熒光顯微鏡檢測川楝素對人腸癌細胞株SW480凋亡形態(tài)的變化;應用流式細胞儀檢測川楝素對人腸癌細胞株SW480細胞周期

2、的影響;激光共聚焦顯微鏡下觀察川楝素作用人腸癌細胞株SW480后β-catenin的核轉(zhuǎn)位情況;實時熒光定量PCR法檢測川楝素對人腸癌細胞株SW480相關(guān)基因表達的影響;免疫印跡法(Western Blotting)檢測川楝素對人腸癌細胞株SW480的相關(guān)蛋白含量的影響。
　　研究結(jié)果:0.031μM-0.5μM濃度的川楝素能抑制人腸癌細胞株SW480的增殖，具有時間及濃度依賴性;0.125μM、0.5μM濃度的川楝素作用人腸癌細

3、胞株SW48048 h后能明顯引起早期凋亡，且形態(tài)學上觀察到出現(xiàn)凋亡小體，并呈現(xiàn)濃度依賴性;與陰性對照組比較，0.125μM、0.25μM、0.5μM的川楝素作用人腸癌細胞株SW48024 h后，隨著藥物濃度的增大，G0/G1期前出現(xiàn)明顯的亞二倍體區(qū)，S期比例由19.40％上升至23.0％，細胞被阻滯于S期。0.5μM濃度的川楝素作用人腸癌細胞株SW48048 h后，細胞核內(nèi)的β-catenin向胞核外轉(zhuǎn)移;0.125μM、0.5μM濃

4、度的川楝素作用于人腸癌SW48048 h后，Bax、Bak、GSK-3β表達上升，Bcl-2、Bcl-xL、Survivin、cyclin D1、cyclin D2、cyclin D3、β-catenin、VEGFA、c-myc、COX-2表達下降;0.125μM、0.5μM濃度的川楝素作用于人腸癌細胞株SW48048 h后，其相關(guān)蛋白Bax、GSK-3β含量上升，Bcl-2、Pro-caspase3、Pro-PARP、P-AKT Se