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文檔簡介
1、目的:研究冬凌草甲素(Oridnin)對人肺腺癌SPC-A-1細胞的抑制作用,并探討其作用機制。
方法:采用MTT法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-y1)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)檢測Oridnin對SPC-A-1細胞增殖的影響;相差顯微鏡、Hoechst33258熒光染色、透射電鏡觀察細胞形態(tài)變化;流式細胞儀分析細胞周期和細胞凋亡率;TUNEL法檢測細胞
2、凋亡;分光光度法檢測Caspase-3、Caspase-9活性;Real-timeRT-PCR、Western blot檢測相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達情況。
結(jié)果:MTT法檢測結(jié)果顯示Oridnin對SPC-A-1細胞具有增殖抑制作用,并具有時間和濃度依賴性;Hoechst33258熒光染色、相差顯微鏡和透射電鏡觀察證實Oridnin能使SPC-A-1細胞出現(xiàn)皺縮、細胞核邊集、空泡變性、染色質(zhì)高度凝集等細胞凋亡形態(tài)學改變;流式
3、細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示Oridnin可誘導SPC-A-1細胞凋亡,20、30、4μmo/L Oridnin作用SPC-A-1細胞48小時后細胞凋亡率分別為3.2%、12.0%、34.1%(P<0.01),并使細胞周期阻滯在G2/M期。40μmo/L Oridnin作用SPC-A-1細胞12、24、48小時后凋亡率分別為4.1%、11.4%、34.1%,表明Oridnin能使細胞發(fā)生凋亡和周期阻滯,并呈現(xiàn)濃度、時間依賴趨勢。TUNEL檢測也證
4、實Oridnin能使SPC-A-1細胞凋亡,且呈現(xiàn)濃度依賴趨勢。分光光度法檢測Caspase3、Caspase9活性,發(fā)現(xiàn)給藥后細胞Caspase-3、Caspase-9活性增加。Real-time RT-PCRZ證實在mRNA水平Lp53、Caspase-3、bax、p21基因轉(zhuǎn)錄上調(diào),bcl-2、c-Myc基因轉(zhuǎn)錄下調(diào),Western blot結(jié)果顯示在蛋白水平上P53、Bax、P21上調(diào)表達,Bcl-2下調(diào)表達。
結(jié)
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