CBP基因在肺癌中的表達及其轉(zhuǎn)染對肺腺癌SPC-A-1細(xì)胞體外生長的抑制作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、Src羧基末端激酶結(jié)合蛋白(csk-binding protein,CBP)是2000年發(fā)現(xiàn)報道的新基因,目前認(rèn)為CBP通過對Src家族成員激酶活性的負(fù)反饋調(diào)節(jié)以及對免疫細(xì)胞激活過程的負(fù)調(diào)節(jié)和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)聯(lián)。CBP的發(fā)現(xiàn),為Src激酶家族在細(xì)胞中的正確定位提供了良好的解釋,為腫瘤的分子機理研究提供了新的思路。目前關(guān)于CBP基因與人類肺癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究國內(nèi)外尚未見報道。 目的: 比較分析CBP基因mRNA和蛋

2、白在人肺癌組織中的表達情況,通過基因重組技術(shù)構(gòu)建CBP基因真核表達載體,將其轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞株SPC-A-1,觀察重組表達載體對SPC-A-1細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。探尋CBP基因在肺腺癌SPC-A-1發(fā)生、發(fā)展中的作用,從而為肺腺癌機理研究和基因治療方面提供新的思路和理論依據(jù)。 方法: (1).RT-PCR及Western-blot方法檢測肺癌組織與對應(yīng)癌旁正常肺組織中CBP基因mRNA和蛋白的表達量,并探尋表達差異與臨

3、床病理的相關(guān)性。 (2).提取SPC-A-1細(xì)胞總RNA,根據(jù)人CBP基因序列設(shè)計引物,應(yīng)用RT-PCR法擴增目的片斷,通過雙酶切定向克隆的方法構(gòu)建CBP基因真核表達載體pcDNA3.0-CBP。 (3).應(yīng)用脂質(zhì)體(Lipofectamine2000)將重組表達載體導(dǎo)入SPC-A-1細(xì)胞,G418篩選陽性克隆,PCR鑒定轉(zhuǎn)染結(jié)果。應(yīng)用RT-PCR及Western-blot法檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞CBP基因mRNA和蛋白表達差

4、異。 (4).通過MTT比色、軟瓊脂集落形成、劃痕修復(fù)、Transwell細(xì)胞運動和Transwell細(xì)胞侵襲等一系列細(xì)胞功能學(xué)實驗,觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株CBP的差異表達對腫瘤細(xì)胞增殖、粘附、運動和侵襲的影響。 結(jié)論: (1).與癌旁正常腫組織相比,人肺癌組織中CBP基因低表達。 (2).成功構(gòu)建了CBP基因的真核表達載體。 (3).應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法成功將CBP基因的真核表達載體導(dǎo)入SPC-A-1細(xì)

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