姐妹染色單體分離相關(guān)基因在腫瘤細(xì)胞A549、SPC-A-1中的表達(dá).pdf

1、腫瘤細(xì)胞的染色體數(shù)目畸變，又稱染色體不穩(wěn)定(chromosomalinstability,CIN)，是腫瘤細(xì)胞的特征性改變之一。以往由于對(duì)正常細(xì)胞染色單體分離機(jī)制認(rèn)識(shí)有限，所以盡管人們很早就發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的染色體數(shù)目異常，但對(duì)其發(fā)生機(jī)制一直缺乏深入研究。近年來，姐妹染色單體分離機(jī)制的研究有了較大進(jìn)展，目前已知：姐妹染色單體分離主要由分離酶控制，分離酶(separase/ESP1)活性受到保全素(securin/PTTG)的抑制；在有絲分裂

2、后期，后期促進(jìn)復(fù)合物(anaphase-promatingcomplex,APC)降解保全素，導(dǎo)致分離酶活化、水解粘合素(cohesin/SCC1)，姐妹染色單體在著絲粒處發(fā)生分離，進(jìn)而移向兩極，分配到兩個(gè)子代細(xì)胞中。上述過程在腫瘤細(xì)胞中有何變化及它與腫瘤細(xì)胞染色體數(shù)目畸變有無聯(lián)系至今未見有系統(tǒng)研究。本研究擬通過觀察姐妹染色單體分離相關(guān)基因在腫瘤細(xì)胞A549、SPC-A-1細(xì)胞周期不同時(shí)相的表達(dá)模式探討上述姐妹染色單體分離機(jī)制與腫瘤細(xì)胞

3、染色體數(shù)目畸變的可能關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?觀察參與腫瘤細(xì)胞姐妹染色單體分離的相關(guān)基因在S、G2/M期的表達(dá)規(guī)律，探討這些基因在腫瘤細(xì)胞染色體數(shù)目畸變中的可能作用。 實(shí)驗(yàn)方法： 1.采用雙胸苷同步化法將A549、SPC-A-1、MRC-5細(xì)胞同步化到S、G2/M期，獲取不同時(shí)相的細(xì)胞。 2.用實(shí)時(shí)熒光定量PCR精確檢測不同時(shí)相細(xì)胞中粘合素、分離酶、保全素、細(xì)胞周期素B1基因的表達(dá)。 3.用原位

4、雜交檢測不同時(shí)相細(xì)胞中粘合素、分離酶、保全素、細(xì)胞周期素B1基因的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 觀察了分離酶、保全素、粘合素和細(xì)胞周期素B1基因在近二倍體和非整倍體細(xì)胞的細(xì)胞周期不同時(shí)相表達(dá)，結(jié)果顯示：無論是近二倍體細(xì)胞還是非整倍體細(xì)胞，其分離酶、周期素B1基因在G2/M期表達(dá)高于S期；粘合素基因在G2/M期表達(dá)低于S期；4而保全素基因則在近二倍體細(xì)胞和非整倍體細(xì)胞中顯示出完全不同的表達(dá)模式：在近二倍體細(xì)胞中，無論是G2/M期還是