新型溶瘤單純皰疹病毒對結(jié)腸癌殺傷作用的研究.pdf

1、目的：研究新型溶瘤單純皰疹病毒（Ⅱ型，oHSV2）對結(jié)腸癌干細胞和非癌干細胞的殺傷作用，及其對腫瘤細胞自我更新能力、侵襲轉(zhuǎn)移能力、腫瘤細胞周期及凋亡的影響，并與傳統(tǒng)化療藥物比較，揭示其溶瘤效應(yīng)、毒性大小等特點。為溶瘤Ⅱ型單純皰疹病毒臨床用于結(jié)腸癌的治療奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：采用干細胞培養(yǎng)基成球培養(yǎng)方法獲得具有干細胞特性的結(jié)腸癌腫瘤細胞（癌干細胞，CSCs），通過傳代培養(yǎng)、克隆形成實驗、體內(nèi)成瘤實驗及Transwell遷移、侵襲

2、實驗證明該群細胞的腫瘤干細胞特性，并通過進一步實驗證明oHSV2對CSCs干性抑制作用。通過細胞增殖-毒性實驗（CCK-8）、細胞周期與凋亡檢測（Annexinn V-FITC/PI）、體內(nèi)抑瘤及生存期觀察等一系列的體內(nèi)體外實驗證明oHSV2及與5-Fu聯(lián)合對結(jié)腸癌的治療作用。
　　結(jié)果：干細胞培養(yǎng)基成球培養(yǎng)細胞具有腫瘤干細胞的特性，表現(xiàn)如下：CSCs細胞在相同的培養(yǎng)條件下可以自我更新（傳代）；與普通粘附培養(yǎng)結(jié)腸癌細胞相比，具有更

3、強的克隆形成能力、體內(nèi)成瘤能力、遷移能力及侵襲能力。oHSV2可顯著削弱CSCs腫瘤干細胞特性。通過CCK-8實驗證實oHSV2可明顯殺傷結(jié)腸癌細胞，且隨著MOI的增大及作用時間的延長能導(dǎo)致細胞存活率明顯下降。oHSV2聯(lián)合5-Fu組對結(jié)腸癌細胞的殺傷作用明顯優(yōu)于任何單一用藥組。細胞周期檢測顯示oHSV2改變細胞周期結(jié)構(gòu)，可誘導(dǎo)S期細胞增多，G0/G1期細胞減少，而5-Fu誘導(dǎo)S期細胞減少，G0/G1期細胞增多，聯(lián)合組導(dǎo)致S期細胞增多，

4、G2/M期細胞顯著減少。細胞凋亡檢測證實病毒可誘導(dǎo)細胞通過壞死和凋亡兩條途徑死亡，但以壞死為主。體內(nèi)實驗證實oHSV2可明顯抑制腫瘤的生長，抑瘤率可達98.54％、96.39%、90.42%（HT-29、SW620、LoVo荷瘤），較單一5-Fu抑瘤效應(yīng)，聯(lián)合用藥抑瘤率可達83.67%，觀察終點oHSV2治療組及聯(lián)合治療組裸鼠重要臟器病理檢查未見明顯器質(zhì)性病變，裸鼠體重?zé)o差異。Kaplan-Meier生存分析顯示oHSV2治療可顯著提高