無(wú)血清培養(yǎng)法初步富集人結(jié)腸癌Caco-2干細(xì)胞的研究.pdf

1、研究背景：
　　 近年來(lái)結(jié)腸癌的發(fā)病率逐漸上升，因治療效果有限，臨床上轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)常見(jiàn)。腫瘤干細(xì)胞被視為腫瘤發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源，其生長(zhǎng)機(jī)制和生物學(xué)特性的進(jìn)一步闡明，將為結(jié)腸癌的診斷、治療、預(yù)防和病情評(píng)估帶來(lái)新的希望。而如何有效地分離純化結(jié)腸癌干細(xì)胞是首要面臨的技術(shù)難點(diǎn)。
　　 目的：
　　 通過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)法初步富集人結(jié)腸癌Caco-2干細(xì)胞，并探討其可行性，以期為Caco-2干細(xì)胞的有效分選方法提供一種思

2、路，為結(jié)腸癌的研究構(gòu)建一種新的干細(xì)胞模型。
　　 方法：
　　 將人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞接種于無(wú)血清培養(yǎng)基中以初步富集Caco-2干細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)增殖過(guò)程，通過(guò)含血清培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基交替培養(yǎng)誘導(dǎo)其分化，利用5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑驗(yàn)證其耐藥性，行免疫熒光染色檢測(cè)結(jié)腸癌干細(xì)胞特異性標(biāo)記物CD133的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.一部分Caco-2細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中逐漸增殖形成懸浮的腫瘤干細(xì)胞球，而

3、一部分不能耐受無(wú)血清環(huán)境的細(xì)胞則死亡。
　　 2.Caco-2腫瘤干細(xì)胞球能在無(wú)血清培養(yǎng)基中連續(xù)傳代，傳代后球體生長(zhǎng)快，數(shù)量多，形態(tài)規(guī)則。
　　 3.Caco-2腫瘤干細(xì)胞球重懸于含血清培養(yǎng)基后，球體逐漸發(fā)生解聚，分化成貼壁生長(zhǎng)的單層細(xì)胞。
　　 4.Caco-2腫瘤干細(xì)胞球在含血清培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基中進(jìn)行交替培養(yǎng)時(shí)，能在單層貼壁細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞球之間發(fā)生相應(yīng)轉(zhuǎn)化。
　　 5.將Caco-2腫瘤干細(xì)胞球

4、消化成單細(xì)胞后，予以無(wú)血清培養(yǎng)聯(lián)合化療藥物干預(yù)顯示，一部分細(xì)胞被殺死，一部分細(xì)胞存活下來(lái)并重新增殖成球，且相對(duì)于單純采用無(wú)血清培養(yǎng)的無(wú)藥物干預(yù)組而言，其Caco-2腫瘤干細(xì)胞球生長(zhǎng)快，數(shù)量多，體積大。
　　 6.無(wú)藥物干預(yù)組、5-氟尿嘧啶干預(yù)組、奧沙利鉑干預(yù)組、5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑干預(yù)組形成的Caco-2腫瘤干細(xì)胞球的數(shù)目分別為:（10.0±1.15）個(gè)/孔、（16.1±1.52）個(gè)/孔、（17.5±1.43）個(gè)/孔、（18

5、.8±1.14）個(gè)/孔，無(wú)藥物干預(yù)組的成球數(shù)分別低于3個(gè)實(shí)驗(yàn)組(P＜0.01)，5-氟尿嘧啶干預(yù)組的成球數(shù)分別低于奧沙利鉑干預(yù)組(P＜0.05)和5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑干預(yù)組(P＜0.01)，奧沙利鉑干預(yù)組的成球數(shù)低于5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑干預(yù)組(P＜0.05)。
　　 7.免疫熒光染色顯示Caco-2腫瘤干細(xì)胞球呈現(xiàn)出橙紅色熒光，即為CD133陽(yáng)性表達(dá)，而陰性對(duì)照未發(fā)現(xiàn)免疫熒光著色。
　　 結(jié)論：
　　 1

6、.人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞可以在無(wú)血清培養(yǎng)基中形成懸浮的腫瘤干細(xì)胞球。
　　 2.Caco-2腫瘤干細(xì)胞球具有自我更新、不斷增殖、分化和耐藥的能力。
　　 3.無(wú)血清培養(yǎng)聯(lián)合化療藥物干預(yù)比單純采用無(wú)血清培養(yǎng)有利于Caco-2干細(xì)胞的富集，奧沙利鉑的富集效率高于5-氟尿嘧啶，二者聯(lián)用的富集效率高于單藥。
　　 4.Caco-2腫瘤干細(xì)胞球可以表達(dá)結(jié)腸癌干細(xì)胞特異性標(biāo)記物CD133。
　　 5.通過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)