無血清懸浮培養(yǎng)法富集人胃癌SGC-7901干細胞及干性鑒定的研究.pdf

1、目的：
　　探討無血清懸浮培養(yǎng)法富集人胃癌SGC-7901懸浮細胞球的可行性，摸索其最佳成球條件；對所獲取的成球細胞進行干性鑒定。
　　方法：
　　1．采用無血清懸浮培養(yǎng)法在含補充因子干細胞培養(yǎng)基及超低粘附環(huán)境中富集胃癌懸浮細胞球，通過補充因子種類和濃度的不同組合確定懸浮細胞球形成的最佳條件。
　　2．球體形成實驗檢測成球細胞的自我更新能力；集落形成實驗檢測成球細胞的克隆增殖能力；免疫熒光實驗檢測成球細胞的多向分

2、化能力；耐藥實驗檢測成球細胞對氟尿嘧啶的耐藥特性；裸鼠成瘤實驗檢測成球細胞的體內成瘤能力；蛋白質印跡法及流式細胞術檢測成球細胞中CD44及Oct4的表達情況。
　　結果：
　　1．無血清含補充因子（EGF：20ng/ml、bFGF：10ng/ml、B27：2％、N-2：1%）干細胞培養(yǎng)基及超低粘附環(huán)境是人胃癌SGC-7901細胞懸浮成球的最佳條件，隨著傳代次數(shù)的增加，其成球速度加快，球體體積增大，立體鏡像明顯。
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3、．球體形成實驗結果顯示6代以后的成球細胞較母代SGC-7901細胞形成懸浮細胞球的效率更高（28.6%v s4.1%），集落形成實驗結果顯示成球細胞較母代SGC-7901細胞具有更強的克隆增殖能力（78.3%v s20.4%）；耐藥實驗結果顯示氟尿嘧啶對成球細胞的抑制率低于母代細胞（P＜0.05,RI=5.68）；裸鼠成瘤實驗結果顯示成球細胞較母代細胞致瘤時間短，成瘤體積大（3127mm3v s424mm3）。免疫熒光實驗結果顯示成球細

4、胞在加入血清后干性相關蛋白Oct4的表達下降，同時下降的還有膜蛋白CD44；流式細胞術結果顯示干性相關蛋白Oct4及膜蛋白CD44在成球細胞中的表達率均顯著高于母代細胞（Oct4：96.03%vs4.69%;CD44：30.17%vs2.58%）。蛋白質印跡法結果顯示Oct4及CD44的蛋白表達量在成球細胞中高于母代細胞（P＜0.05）。
　　結論：
　　1．無血清含EGF（20ng/ml）、bF GF（10ng/ml）、N