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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
研究多甲氧基黃酮即紫花牡荊素(casticin,CAS)誘導(dǎo)源自人結(jié)腸癌 HCT116細(xì)胞系腫瘤球形成細(xì)胞即結(jié)腸癌干細(xì)胞樣細(xì)胞(colon cancer stem cell like cells, CCSLCs)凋亡作用。探討CAS誘導(dǎo)CCSLCs凋亡是否涉及其降低細(xì)胞Akt蛋白磷酸化水平作用。
方法:
體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌 HCT-116細(xì)胞,干細(xì)胞條件培養(yǎng)基成球培養(yǎng)法分離和富集CCSLCs為受試對(duì)象
2、。采用腫瘤球形成法檢測(cè)不同濃度CAS對(duì)CCSLCs自我更新的影響。碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)定量分析CAS對(duì)CCSLCs細(xì)胞凋亡率的影響。DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察CAS對(duì)CCSLCs細(xì)胞 DNA核小體間斷裂的影響。熒光標(biāo)記 CD133抗體 FCM分析CAS對(duì)CCSLCs干細(xì)胞標(biāo)志物CD133表達(dá)的影響。最后,采用Western Blot分析CAS對(duì)CCSL
3、Cs細(xì)胞Akt蛋白磷酸化水平的影響。
結(jié)果:
體外培養(yǎng)和擴(kuò)增人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞系細(xì)胞,采用干細(xì)胞條件培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)10天,細(xì)胞呈典型非粘附三維結(jié)腸癌腫瘤球體生長(zhǎng)。腫瘤球形成法檢測(cè)結(jié)果顯示,在5.0~10.0μM濃度范圍內(nèi),CAS以濃度依賴方式減少CCSLCs的腫瘤球數(shù)目(P<0.05)。PI染色FCM分析結(jié)果表明CAS(5.0和10.0μM)增加CCSLCs凋亡率,呈濃度依賴趨勢(shì)(P<0.05)。CAS(5.0
4、和10.0μM)處理CCSLCs24小時(shí), DNA瓊脂糖凝膠電泳呈現(xiàn)核小體間DNA斷裂的梯形條帶圖譜。熒光標(biāo)記CD133 抗體FCM分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)CAS以濃度依賴方式降低干細(xì)胞標(biāo)志蛋白CD133表達(dá)(P<0.05)。Western Blot檢測(cè)提示 CAS抑制CCSLCs細(xì)胞Akt蛋白磷酸化,成濃度依賴性(P<0.05)。
結(jié)論:
1. CAS具有抑制CCSLCs自我更新及誘導(dǎo)CCSLCs凋亡作用。
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