冬凌草甲素對人結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞株的抑制生長及誘導(dǎo)凋亡的作用.pdf

1、背景與目的:大腸癌是常見的惡性腫瘤之一,近年來發(fā)病率迅速增長.中國大腸癌的發(fā)病率已從30年前的10/10萬上升到現(xiàn)在的30/10萬,在惡性腫瘤的排名中,從第6位上升到第3位.大量的研究資料表明冬凌草甲素對多種腫瘤具有生長抑制作用,但冬凌草甲素對結(jié)腸癌的作用國內(nèi)外尚未見有報(bào)道.該課題擬通過體外實(shí)驗(yàn)探討冬凌草甲素誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8凋亡作用的機(jī)理.技術(shù)路線為:用MTT法測定不同濃度冬凌草甲素對細(xì)胞的生長抑制作用,采用HE染色法觀察冬

2、凌草甲素誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8凋亡的形態(tài)學(xué)變化;以免疫組化技術(shù)檢測凋亡相關(guān)蛋白caspase3和survivin的表達(dá)情況,利用流式細(xì)胞儀測定不同濃度的冬凌草甲素作用不同時(shí)間誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的凋亡率及細(xì)胞周期的變化,以期探討冬凌草甲素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)理,從而為冬凌草甲素作為抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù).方法:1.細(xì)胞株選用人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8為材料;2.MTT比色法測定不同濃度冬凌革甲素對結(jié)腸癌細(xì)胞的生長抑制率;3.HE染

3、色法觀察5μg/ml冬凌草甲素作用48小時(shí)后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;.4.免疫組化SP法檢測5μg/ml冬凌草甲素作用48小時(shí)后實(shí)驗(yàn)組與對照組細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Caspase3、Survivin的蛋白表達(dá)變化;5.流式細(xì)胞儀檢測不同處理組的周期時(shí)相變化及凋亡情況;6.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,采用正態(tài)性檢驗(yàn),單因素方差分析,獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),χ<'2>檢驗(yàn),以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn).結(jié)論:1 冬凌草甲素對人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-8的生