紫花牡荊素對(duì)宮頸癌細(xì)胞凋亡及線(xiàn)粒體凋亡途徑的影響.pdf

1、目的：研究紫花牡荊素(Casticin，CAS)誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡作用，探索其誘導(dǎo)凋亡機(jī)制是否通過(guò)促進(jìn)活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)生成，進(jìn)而激活線(xiàn)粒體凋亡途徑。評(píng)價(jià)CAS作為新型宮頸癌治療藥物的潛在價(jià)值。
　　 方法：體外培養(yǎng)宮頸癌HeLa細(xì)胞和外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)。用不同濃度的CAS作用HeLa細(xì)胞，細(xì)胞凋亡ELI

2、SA試劑盒檢測(cè)HeLa細(xì)胞組蛋白/DNA碎片；碘化丙啶(PI)染色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)定量分析Sub-G1細(xì)胞百分率；DNA瓊脂糖凝膠電泳觀(guān)察細(xì)胞DNA梯形條帶。caspase比色活性試劑盒檢測(cè)caspase-3/-9活性；Rh123探針染色流式法檢測(cè)細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位；采用DCFH-DA探針流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞ROS生成；Westernblot檢測(cè)細(xì)胞色素c、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和XIAP蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：不同

3、濃度CAS處理24h后，HeLa細(xì)胞組蛋白/DNA碎片增加(P<0.05)；Sub-G1細(xì)胞百分率顯著增高(P<0.05)；DNA瓊脂糖凝膠電泳法觀(guān)察到2.0、4.0μMCAS導(dǎo)致HeLa細(xì)胞出現(xiàn)典型的DNA梯形條帶。CAS處理組caspase-3和caspase-9活性均明顯升高(P<0.05)，而活性氧特異性抑制劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)預(yù)處理組與相同濃度CAS處理組相比，caspase-3和caspase-9活性均明顯下降(P<

4、0.05)；CAS處理組線(xiàn)粒體膜電位明顯降低(P<0.05)。經(jīng)10mMNAC預(yù)處理，線(xiàn)粒體膜電位與相同濃度CAS處理組相比明顯升高(P<0.05)；CAS處理組ROS明顯升高(P<0.05)；Westernblot檢測(cè)細(xì)胞色素c、Bax顯著升高(P<0.05)，而B(niǎo)cl-xL和XIAP蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)，但Bcl-2水平?jīng)]有顯著變化。
　　 結(jié)論：
　　 CAS以劑量依賴(lài)和時(shí)間依賴(lài)方式誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)