褪黑素對(duì)大鼠胸腺細(xì)胞凋亡及線粒體途徑凋亡調(diào)控蛋白的影響.pdf

1、目的： 通過(guò)研究體外培養(yǎng)大鼠胸腺細(xì)胞的自然凋亡和褪黑素對(duì)其凋亡的影響及機(jī)制，探索褪黑素影響胸腺細(xì)胞凋亡的機(jī)制，進(jìn)一步揭示褪黑素與胸腺發(fā)育及細(xì)胞免疫之間的關(guān)系，從而豐富對(duì)神經(jīng)一內(nèi)分泌一免疫網(wǎng)絡(luò)的認(rèn)識(shí)。 方法： ①體外培養(yǎng)大鼠胸腺細(xì)胞，分為空白對(duì)照組(Ctrl)和褪黑素干預(yù)組M1、M2、M3、M4、M5(藥物濃度分別為10-3、10-4、10-6、10-8、10-10mol/L)。 ②在培養(yǎng)的第4、8小時(shí)以A

2、rlnexin-V/PI雙標(biāo)法染色及流式細(xì)胞儀檢測(cè)，觀察不同濃度褪黑素干預(yù)下胸腺細(xì)胞凋亡率的變化。 ③用RT-PCR法及凝膠成像分析系統(tǒng)觀察分析培養(yǎng)的第4、8小時(shí)，不同濃度褪黑素干預(yù)下胸腺細(xì)胞Bax、Bcl-x1、Bim mRNA量的變化。 ④運(yùn)用western blot法觀察培養(yǎng)的第4、8小時(shí)，不同濃度褪黑素干預(yù)下胸腺細(xì)胞Bax、Bcl-x1和Bim蛋白表達(dá)量的變化。 結(jié)果: ①流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示，培

3、養(yǎng)4小時(shí)，F(xiàn)ITC+/PI的大鼠胸腺細(xì)胞高于8小時(shí)，相同培養(yǎng)時(shí)間的M1、M2、M3組FITC+/PI細(xì)胞明顯下降。 ②半定量PT-PCR及Western blot結(jié)果顯示，Bax和Bim的表達(dá)隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，mRNA與蛋白水平一致，但對(duì)照組與褪黑素干預(yù)組之間無(wú)明顯差異；相同培養(yǎng)時(shí)間的M1、M2、M3組與對(duì)照組相比，Bcl-x1mRNA與蛋白水平均出現(xiàn)升高，但同一處理組的4小時(shí)與8小時(shí)比較無(wú)明顯變化。 結(jié)論: 體