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1、目的:建立紫外線(6.16mJ/cm<'2>)對體外培養(yǎng)的小鼠胸腺淋巴細(xì)胞輻射損傷的病理模型,著重從細(xì)胞凋亡的線粒體途徑,探討扇貝多肽(PCF)對紫外線輻射損傷的小鼠胸腺淋巴細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制?! 》椒ǎ篗TT法檢測胸腺淋巴細(xì)胞活性;流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡率;Fluo-3-AM熒光染色測定細(xì)胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]<,I>的變化;Rhodamine 123熒光染色測定線粒體膜電位(△ψ<,M>)的改變;免疫細(xì)胞化學(xué)檢測細(xì)胞Bcl-
2、2、Bax基因蛋白的表達(dá);流式細(xì)胞儀檢測Caspase-3的含量;應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測紫外線損傷淋巴細(xì)胞和PCF預(yù)處理的淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)?! 〗Y(jié)果:PCF能顯著提高紫外線輻射后小鼠胸腺淋巴細(xì)胞的活性(P<0.01);降低細(xì)胞凋亡率(P<0.01);降低ROS、MDA含量(P<0.05),從而提高小鼠胸腺淋巴細(xì)胞清除活性氧和自由基的能力,阻斷ROS介導(dǎo)的DNA損傷;PCF能降低淋巴細(xì)胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]<,i>(P<0.05);
3、穩(wěn)定線粒體的膜電位(P<0.05);上調(diào)Bcl-2蛋白和下調(diào)Bax蛋白的表達(dá)(P<0.05),由此阻斷DNA損傷介導(dǎo)的線粒體通路的信號轉(zhuǎn)導(dǎo);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明PCF在0.125%-0.5%范圍內(nèi)劑量依賴性降低uV誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的Caspase-3含量(P<0.05)?;蛐酒Y(jié)果顯示細(xì)胞凋亡線粒體通路調(diào)控基因IJCP-2、VDCA-1Bcl-2和Caspase-3,8等均參與了紫外線誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞凋亡過程和PCF的抗凋亡作用。 結(jié)論:
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