小鼠視網(wǎng)膜紫外線光損傷發(fā)病機制的實驗研究.pdf

1、目的： 1.制備較理想的視網(wǎng)膜紫外線光損傷的小鼠模型。 2.探討凋亡相關(guān)蛋白Fas、FasL、Bcl-2及Bax在視網(wǎng)膜紫外線光損傷發(fā)生、發(fā)展中的作用。 方法:將30只昆明小鼠隨機分為正常對照組、實驗組。實驗組再分為紫外線光照1、2、3、4周組，所有小鼠經(jīng)晝夜循環(huán)光環(huán)境適應(yīng)7天，實驗前暗適應(yīng)36小時，建立紫外線光損傷模型，實驗組接受每天持續(xù)8小時的紫外線光照射，光照強度為2200±138Lux，分別在照射后1、2

2、、3、4周后摘除眼球，右眼行視網(wǎng)膜HE及Fas、FasL、Bcl-2、Bax染色，左眼行視網(wǎng)膜勻漿中SOD活力、MDA含量檢測；光鏡觀察視網(wǎng)膜的形態(tài)學改變并對比各組視網(wǎng)膜ONL層厚度的差異，應(yīng)用免疫組織化學染色法比較Fas、FasL、Bcl-2及Bax在各組視網(wǎng)膜陽性表達數(shù)量的差異。 結(jié)果: 1.光照前正常小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)正常，組織結(jié)構(gòu)層次清楚，內(nèi)外節(jié)排列整齊，外核層細胞排列規(guī)則，染色均勻，細胞形態(tài)規(guī)整，F(xiàn)as、FasL、

3、Bcl-2、Bax染色陰性及弱陽性。光照后小鼠視網(wǎng)膜感光細胞層出現(xiàn)了光損傷，光鏡示不同程度的外節(jié)空泡樣變，內(nèi)外節(jié)排列紊亂、腫脹、碎解，外核層變薄，出現(xiàn)核濃染及不規(guī)則細胞核，隨光照后時間推移而損傷逐漸加重。Fas、FasL蛋白分別自損傷后一周開始看到陽性細胞或表達增強，并隨時間延長，表達增強，3w時達高峰；Bcl-2隨光照時間延長稍有增強；Bax表達呈持續(xù)增強。 2.通過計算機輔助圖像分析對比各組外核層厚度變化，紫外線光照組光照后

4、外核層（ONL）厚度與正常對照組比較明顯變薄，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05），實驗組各組之間除光照3w組與光照4w組外，其余各組之間比較差別均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 3.紫外線光照組光照后SOD活力、MDA含量與正常對照組比較差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 結(jié)論:中長波紫外線光能夠引起小鼠視網(wǎng)膜的光損傷；其損傷程度為光照強度及時間依賴性。視網(wǎng)膜紫外線光損傷與脂質(zhì)過氧化及自由基的產(chǎn)生有關(guān)。凋亡相關(guān)基因蛋白Fa