高良姜總黃酮影響宮頸癌細(xì)胞增殖、凋亡及基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)理研究.pdf

1、目的：研究高良姜總黃酮對人宮頸癌細(xì)胞株SiHa的增殖、形態(tài)學(xué)變化和其細(xì)胞凋亡并對相關(guān)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平的影響，探討高良姜總黃酮的抗腫瘤作用機(jī)理，為高良姜總黃酮作為抗腫瘤藥物開發(fā)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1）根據(jù)原有的工藝，采用乙醇提取，石油醚脫脂，氯仿萃取等方法得到高良姜總黃酮；
　　2）用倒置顯微鏡觀察不同濃度高良姜總黃酮在不同時(shí)間內(nèi)作用于宮頸癌SiHa細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)變化；
　　3）采用四

2、甲基偶氮唑鹽（MTT）顯色法，檢測不同濃度高良姜總黃酮在不同時(shí)間內(nèi)對宮頸癌SiHa細(xì)胞存活和生長所產(chǎn)生的不同影響，設(shè)抗癌藥順氯氨鉑（cis-Dichlorodiamineplatinum，DDP）為陽性對照；
　　4）通過Annexin V-FITC/PI雙染色、流式細(xì)胞儀檢測并分析高良姜總黃酮對SiHa細(xì)胞24h作用而引起的細(xì)胞凋亡率，設(shè)抗癌藥順氯氨鉑（DDP）為陽性對照；
　　5）Trizol一步法抽提高良姜總黃酮干預(yù)的

3、SiHa細(xì)胞總RNA，并應(yīng)用熒光定量PCR法，簽定高良姜總黃酮誘導(dǎo)SiHa細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平；
　　6）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以mean±SD表示，以SPSS17.0版專用統(tǒng)計(jì)分析軟件對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行一般線性模型單變量方差分析。
　　結(jié)果：
　　1）從高良姜提取的總黃酮在0～400μg/ml濃度范圍內(nèi)，隨著高良姜總黃酮干預(yù)SiHa細(xì)胞的劑量增加，細(xì)胞活力顯著下降（12％），其IC50值為（24h的127

4、.393μg/ml，48h的84.584μg/ml，72h為58.054μg/ml）抑制細(xì)胞活力的趨勢與陽性對照基本一致，并呈濃度和時(shí)間依賴性；
　　2）流式細(xì)胞儀檢測顯示，在50和100μg/ml高良姜總黃酮?jiǎng)┝恳餝iHa細(xì)胞凋亡，其早期凋亡率升高（17.35%和22.4%），但是遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于陽性對照組的早期凋亡率（60.4%）；
　　3）高良姜總黃酮干預(yù)宮頸癌細(xì)胞株 SiHa后可使OCT4，ALDH1A1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平有顯