EZH2基因?qū)m頸癌預(yù)后的影響及調(diào)控宮頸癌CaSki細胞株增殖的研究.pdf

1、研究背景:
　　 宮頸癌是繼乳腺癌、膽管癌之后世界第三大女性惡性腫瘤，2008年總發(fā)病例和死亡病例分別為529800、27500例，占腫瘤總發(fā)病例和總死亡病例的9％、8％，而其中85％的病例發(fā)生在發(fā)展中國家。在世界范圍內(nèi)盡管宮頸細胞學(xué)篩查已經(jīng)顯著降低了宮頸癌的發(fā)病率和死亡率，但在發(fā)展中國家宮頸癌仍是主要的腫瘤死亡原因。即使在發(fā)達國家宮頸癌相關(guān)的費用仍然是一筆巨大財政支出。為了改善宮頸癌的預(yù)后及研究新的宮頸癌治療策略，我們應(yīng)該對宮

2、頸癌腫瘤形成的分子生物學(xué)機制做深入研究。
　　 特殊類型的HPV感染是宮頸癌的主要致病因素，有研究發(fā)現(xiàn)HPV陽性宮頸癌組織中多伴EZH2蛋白高表達。EZH2屬于PcG(Polycomb Group)基因家族核心成員，是多硫抑制復(fù)合物2(PRC2)的催化亞基。除了EZH2蛋白，多硫抑制復(fù)合物2由另外的EED、SUZ12蛋白等組成，通過對核小體的共價修飾和染色質(zhì)的重構(gòu)發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。EZH2蛋白介導(dǎo)的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶使靶基因組蛋白

3、氨基末端賴氨酸甲基化，因而發(fā)生表觀遺傳學(xué)的改變導(dǎo)致靶基因轉(zhuǎn)錄抑制，從而調(diào)節(jié)細胞的增殖。在多種惡性腫瘤均發(fā)現(xiàn)EZH2表達升高，例如胃癌、膽囊癌、膀胱癌、卵巢癌等，是重要的預(yù)后影響因子。
　　 目的:
　　 探究EZH2在宮頸癌組織中的表達及EZH2在宮頸癌細胞增殖中的作用機制。
　　 方法:
　　 采用免疫組化法分別檢測20例正常宮頸組織、20例宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)、101例宮頸癌中EZH2、Ki-67

4、蛋白的表達，并對EZH2與Ki-67、臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性進行探討;應(yīng)用siRNA干擾技術(shù)沉默EZH2表達，然后通過MTT法檢測沉默EZH2基因?qū)m頸癌增殖的影響，用實時定量PCR法檢測沉默EZH2基因后相關(guān)基因表達的變化并通過蛋白免疫印跡法進一步驗證。
　　 結(jié)果:
　　 1.EZH2在正常宮頸組織、CIN、宮頸癌中表達逐漸升高。EZH2在正常宮頸組織中表達較低，其陽性率為10％(2/20);CIN組織中EZH2

5、表達陽性率為60％(12/20)，較正常宮頸組顯著升高，且兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);宮頸癌中EZH2陽性率為68.3％(69/101)，明顯高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，較CIN組陽性率升高，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.470)。
　　 2.Ki-67在正常宮頸組織、CIN、宮頸癌中表達逐漸升高，陽性率依次為5％(1/20)、50％(10/20)、57.4％(58/101)，且在宮頸癌中EZH2和K

6、i-67的表達呈顯著正相關(guān)(r=0.440，P＜0.05)。
　　 3.EZH2的表達與宮頸癌組織病理分級、FIGO臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān);而與患者年齡、腫瘤直徑、組織學(xué)類型無明顯相關(guān)性。
　　 4.Kaplan-Meier法分析顯示:EZH2陰性組平均生存時間53.3個月，優(yōu)于陽性組平均生存時間42.3個月，其兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003，log-ranktest)。Cox比例風(fēng)險模型分析發(fā)現(xiàn)

7、EZH2與病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移同為宮頸癌的獨立預(yù)后因素。
　　 5.在轉(zhuǎn)染EZH2-siRNA后48小時對細胞增殖的影響最明顯，沉默EZH2基因可明顯抑制CaSki細胞的生長。
　　 6.應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測顯示:EZH2-siRNA可顯著抑制EZH2表達并促進P57基因的轉(zhuǎn)錄;用蛋白免疫印跡法進一步驗證EZH2對P57的影響，我們發(fā)現(xiàn)EZH2-siRNA可顯著抑制EZH2蛋白的表達、促進P57蛋白的表達。