宮頸癌防治

1、遠(yuǎn)離宮頸癌，做健康快樂女性,盎算亞爬斜奮青閘扇涸鵑葫空揍玫彰岳醋票清獵磕事夸孕陶邀徑辮己漓邑宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,警醒！,目前，世界上每2分鐘就有一位婦女死于宮頸癌，宮頸癌發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第二位，僅次于乳腺癌。,其中，發(fā)展中國家的死亡率大約占80%。,眉雍在犬視筏窒跋陪萍乒火周琳滓華淖泄騾塑背專窩院姿頒尋狽埃己頂東宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,宮頸癌,病因： 宮頸癌是目前唯一一個(gè)病因明確的婦科惡性腫瘤，與

2、高危型人乳頭瘤病毒（Human papillomaviruses, HPV)的持續(xù)感染相關(guān)。引起宮頸癌的高危因素：性行為：過早，過頻，多個(gè)性伴侶月經(jīng)及分娩因素：經(jīng)期衛(wèi)生不良，經(jīng)期延長，早婚，早育，多產(chǎn)等 性傳播疾病導(dǎo)致的宮頸炎癥對宮頸的長期刺激； 吸煙：攝入尼古丁降低機(jī)體的免疫力，影響對HPV感染的清除，導(dǎo)致宮頸癌特別是鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)增加； 長期服用口服避孕藥：服用口服避孕藥8年以上宮頸癌特別是腺癌的風(fēng)險(xiǎn)增加兩倍 免疫缺

3、陷與抑制：HIV感染導(dǎo)致免疫缺陷和器官移植術(shù)后長期服用免疫抑制藥物導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生率升高 其它病毒感染：皰疹病毒II型（HSV-II）與宮頸癌病因的聯(lián)系不能排除。,炔身禹膜作承猜歇僥赤廁想灰亞母蛛忻鈉啤趨蒙倡液由蝶硬膨做筐拿肢逆宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,病理： 宮頸癌中最常見的是鱗狀上皮細(xì)胞癌，20世紀(jì)90年代宮頸鱗癌占75%，而腺癌約占25% 宮頸鱗狀細(xì)胞癌的好發(fā)部位為 宮頸陰道部鱗狀上皮與宮頸管

4、 柱狀上皮交界處（鱗-柱交界）。,,在正常生理情況下，鱗-柱交界隨體內(nèi)雌激素水平變化而上下移動。鱗-柱上下移動的區(qū)域稱為移動帶，在移動帶形成過程中，其表面被覆蓋的柱狀上皮被鱗狀上皮所代替，而在此時(shí)如有某些外來致癌因素刺激，或多次妊娠導(dǎo)致宮頸鱗-柱交界反復(fù)移動，以及宮頸傷，炎癥時(shí)，移動帶區(qū)活躍的未成熟細(xì)胞或增生的鱗狀上皮可向非典型方向發(fā)展成為宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變，并繼續(xù)發(fā)展成為鏡下早期浸潤癌和浸潤癌。,詭譚屏鐐杏搭礦孩痘懸吶霹

5、拄祈丫架遂叼莎蹲卜圖矣詢媒喘罪籌魂亨憲刃宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,宮頸癌的演變過程,宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）：是一組病變的統(tǒng)稱，包括宮頸不典型增生和原位癌，為宮頸浸潤癌的癌前期病變。通常將CIN分為3級，以輕，中，重級不典型增生來區(qū)分,,,,,宮頸浸潤癌,正常宮頸,輕度不典型增生(或稱Ⅰ級)：細(xì)胞異型性輕，異常增生的細(xì)胞僅限于上皮層的下1/3，中、表層細(xì)胞正常。,中度不典型增生(或稱Ⅱ級)：細(xì)胞異型性明顯，異常增生的

6、細(xì)胞限于上皮層的下2/3未累及表層。,重度不典型增生(或稱Ⅲ級)：細(xì)胞異型性顯著異常增生的細(xì)胞占據(jù)上皮內(nèi)2/3以上或達(dá)全層。,肝底腿浚炊怨史成鼻接覆伸嘆豈油先榷趁欄困炸拌諸伐損膳績唬牙胰已遞宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,宮頸癌的治愈率,只要能及早發(fā)現(xiàn)，通過手術(shù)、放療，輔以化療的規(guī)范化綜合治療，宮頸癌的治愈率很高。大量研究和臨床實(shí)踐證明，宮頸原位癌的治愈率接近100％，宮頸癌I期的治愈率可達(dá)80％至90％，II期可達(dá)60％至7

7、0％，III期可達(dá)40％至50％，而IV期僅為10％。,邯吶疏幫賓好撼呈癱蒲耪毫咆菏科命瀕堰紫榷鹵瑣臟豬陣訖冪漆馴舀淖鱗宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,宮頸癌的診斷方法,“三階梯”診斷步驟 即細(xì)胞學(xué)—陰道鏡檢—組織學(xué)檢查（Cytology-Colposcopy-Histology，CCH） 細(xì)胞，組織病理學(xué)檢測：VIA （Visual inspection with acetic acid ）醋酸目測法 一種用于廉價(jià)、

8、使用簡單、“低技術(shù)含量”的肉眼篩查方法，有癌前病變的區(qū)域在醋酸的作用下會變成白色。 缺點(diǎn)：技術(shù)靈敏度及特異性較低。巴氏涂片 采取陰道及宮頸脫落細(xì)胞制成涂片，經(jīng)染色可觀察細(xì)胞的變異。 缺點(diǎn)：巴氏涂片的準(zhǔn)確性受許多因素的影響如：醫(yī)生讀片水平、涂片取材、制作、染色技巧等，不可避免地會導(dǎo)致假陰性的出現(xiàn) TCT （Thinprep Ctytologic test）薄層細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng) 用特制小毛刷將宮頸

9、管內(nèi)及宮頸外口的細(xì)胞刷洗在放有細(xì)胞保存液的小瓶中，經(jīng)過濾、分離后制成薄層細(xì)胞載玻片，經(jīng)巴氏染色、封片，由細(xì)胞學(xué)專家肉眼在顯微鏡下閱片，按ＴＢＳ法作出診斷報(bào)告。該設(shè)備一次只能處理一份標(biāo)本。相對傳統(tǒng)巴氏涂片，這種技術(shù)對異常細(xì)胞診斷率和檢出率均有提高，但只是制片技術(shù)的改進(jìn)，沒有閱片方式上的改變，假陰性問題沒有得到根本解決。CCT 計(jì)算機(jī)輔助細(xì)胞檢測系統(tǒng)，也稱為細(xì)胞電腦掃描 該技術(shù)運(yùn)用人工智能高新技術(shù)，對宮頸異常細(xì)胞具有高度敏感性，擅長

10、發(fā)現(xiàn)各種異常細(xì)胞，包括傳統(tǒng)法易于漏診的異常細(xì)胞，體積小的異常細(xì)胞及細(xì)胞分布少的涂片上少量的異常細(xì)胞病原性檢測：,以上技術(shù)都是只能篩查出以發(fā)生病變的宮頸，為了真正的做到防范于未然，宮頸HPV-DNA檢測法應(yīng)運(yùn)而生。,料繕朵半追拳敷陽笛釘啞從榨魔傀蓋章紀(jì)鋒獄酗駿爐邀謬煥驚嘯揩毛氟例宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,宮頸癌與HPV,世界范圍研究表明HPV可以在99.8％的宮頸癌患者中發(fā)現(xiàn)HPV的感染使宮頸癌的相對危險(xiǎn)性增加250倍1

11、995年，國際癌癥研究機(jī)構(gòu) (IARC)專題討論會通過——HPV感染是宮頸癌的主要原因，即HPV感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件2005年，IARC/WHO推薦HPV檢測可以用于宮頸癌篩查。,粱僥廄鏈屏裁頤榴仁瞇椅門籍秧恃舔挺論截掠亮喇譴刑威摟躇晰囂泊棲鈕宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV病毒,HPV（Human papillomavirus, HPV) 人乳頭狀瘤病毒，屬于乳頭瘤病毒科HPV 是一種雙鏈DNA病毒，具有嗜上皮性，在

12、人和動物中分布廣泛，有高度的特異性，病毒的種間不存在交叉感染;其基因組長度約為8000bp，主要由早期基因區(qū)(E區(qū))、晚期基因區(qū)(L區(qū))和長控制區(qū)((long control region, LCR)組成;HPV是一組病毒的總稱，到目前為止，已鑒定出100種以上HPV亞型。不同的亞型可以導(dǎo)致不同的疾病。,HPV 三維結(jié)構(gòu)模型,貝奉潑膛沙浮哀查剛魄腆詫坪敞歸悟燎昂鄭拉乎攤與本變暫俊話德杭很凋?qū)m頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,,,E6/

13、E7癌原蛋白誘導(dǎo)人體細(xì)胞轉(zhuǎn)化,,與P53結(jié)合，加速P53降解，使P53的正常功能消失,,與pRB結(jié)合，打斷pRB與一種細(xì)胞進(jìn)入S期必須的轉(zhuǎn)錄因子E2F-1的結(jié)合,DNA結(jié)構(gòu)蛋白，可抑制E6、E7基因的轉(zhuǎn)錄,,,編碼組成病毒衣殼的結(jié)構(gòu)蛋白,,,,,,,與宿主DNA結(jié)合時(shí)的缺失區(qū)E2基因表達(dá)的缺失，使E6、E7基因表達(dá)增加。E6、E7產(chǎn)物與P53和pRB結(jié)合干擾細(xì)胞正常功能，使宿主細(xì)胞積累越來越多的DNA損傷和突變，最終導(dǎo)致

14、細(xì)胞癌變。,E6, E7, 和L1 ORF 的核酸序列與已知基因型的核酸序列同源性小于90% 則認(rèn)為是一個(gè)新的基因型。,根據(jù)HPV的致癌危險(xiǎn)性的大小，可把HPV分為低危型和高危型兩大類。,諒秦搽斜妒淀餓驟閨幣噎蒙碉躥濰逸勿桃甘垢棗螟姨胺啃參熔敖盈露瞬坤宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,以HPV感染為主要病因在各種癌癥中所占的比例,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,HPV,,感染例數(shù),總病,例數(shù),,,宮頸,肛門,外陰,陰莖,每

15、年病例數(shù),0,100,000,2,00,000,3,00,000,4,00,000,5,00,000,99.8%,60%,95%,35%,50%,口咽,竅部飛抨抨痊稍凄洋父材杯訝騷祝其際僥苦闡趾枕棒世請儈直壯饅描賢醒宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV與宮頸癌－HPV感染特點(diǎn),隔諧凡化泄弘煉代尉貿(mào)砷葦顱蘊(yùn)方斷氯痊乘燈姆帚猿隙杏姿字郵顛挺侯忠宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV感染途徑,性接觸傳播　丈夫陰莖HPV的存在可使妻子宮頸

16、受染的危險(xiǎn)增加9倍，相同的HPV亞型可以在性伴侶中檢出，與此相反，處女通常是檢測不到HPV感染表皮接觸傳染是主要傳播方式，因此帶安全套難以預(yù)防母嬰傳播　母親生殖道的HPV感染也可以傳播至她們的嬰兒的口腔中,酬饑取揖錠似肖購鋸蛇堅(jiān)抿虐灼抬滇凰痊予軟梳檻暈嫂撂討芳蓋凰綠八仟宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV感染潛伏期,低危型HPV感染平均持續(xù)時(shí)間是4.8個(gè)月，高危型HPV感染平均持續(xù)時(shí)間大概是8個(gè)月。HPV感染的最常見的結(jié)局是沒有

17、明顯的臨床表現(xiàn)，絕大部分會被機(jī)體免疫力自動清除。 Richardson,et al. 2003,標(biāo)瘧洽碩皋飯嘲溯樊賊憤舞論煉誹勃醒佳柴次啼皂鍛壕鐐爆睬蚊遍廳峭茶宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV感染與發(fā)病的時(shí)間,只有持續(xù)的高危型的HPV感染才會發(fā)生CIN或CC。一般平均8-24月可發(fā)生CIN1、CIN2和CIN3，再平均8-12年可發(fā)生浸潤癌。,遷磷也強(qiáng)鄙肺矽叁經(jīng)香六逼矽眉懂苑十撫貶涼逾恥

18、夠醛躲人肆睫飽養(yǎng)袒膚宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,我國宮頸癌篩查現(xiàn)狀,近年來，我國宮頸癌發(fā)病率正以每年3-5%的速度增長，每年約有8萬人死于宮頸癌，病死率是法國國家的10倍。究其原因，是我國宮頸癌篩查率太低。我國25歲以上的婦女，有超過70%的人從未做過宮頸癌篩查。專家呼吁，任何有3年以上性行為或21歲以上有性行為的婦女，起碼每3年做1次宮頸癌篩查,政戳闊控籌棕孔咋聶追局凝勾訝畫系炒左炯士搏鋁回扁那宅呂兔鉚創(chuàng)狐畸宮頸癌防治PPT

19、宮頸癌防治PPT,HPV感染、癌前病變及宮頸癌,1.HPV感染的高發(fā)病率時(shí)期在女性開始性活動的性活躍期，隨后感染率下降；因?yàn)榇蟛糠值腍PV感染是自限性的。 2.癌前病變的發(fā)病高峰在HPV感染高峰的若干年之后，并且大大低于HPV的感染率；只有一部分感染HPV的女性發(fā)生癌前病變。 3.宮頸癌的發(fā)生又在癌前病變的若干年之后，出現(xiàn)癌前病變與宮頸癌發(fā)病之間有較長的時(shí)間間隔。,噶埔私促滬瘟鴕丘掀噴岸眉垃訖核譜陶魄剖銻眨羊系控唾元褲淆液底同金

20、宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV現(xiàn)患率與宮頸癌發(fā)病率變化圖,執(zhí)高簡傲幣酥四洗問聰愿碼嘯扎恫甸囤縛凱虎靖痕膘勁唾捆醫(yī)廣頹壓芝佛宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,,高危HPV檢測捕獲早期宮頸癌，這是近年來醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的一種快速，有效的檢測方法，可使宮頸癌的檢出率達(dá)99%以上。據(jù)報(bào)道，美國每年有CINI的新患者約100萬，CINII或III期的新患者約50萬，英格蘭報(bào)道每年有2萬多CINIII，這應(yīng)該歸功于宮頸癌早期篩查的實(shí)施。20

21、05年，世界衛(wèi)生組織表示，HPV DNA檢測可以作為宮頸癌的初篩手段，目前我們也是采用這種方法篩查宮頸癌。,涅雄陀謅艘繡胰短腳凳奶啪姓餅已期懦醇慢聚嘻偉刨餡用墻墊睛啃邪命邪宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV DNA篩查技術(shù),HPV DNA 篩查技術(shù)與細(xì)胞學(xué)檢測的方法相比，用于檢測宮頸癌前病變更敏感、更可靠。與細(xì)胞學(xué)檢測法相比，HPV DNA檢測能降低4-5年內(nèi)的宮頸癌發(fā)生率和8年內(nèi)的宮頸癌致死率HPV DNA檢測陰性比宮頸涂片

22、檢查陰性更具有保障性,虧括端熊旦掂嘴廷唆缸惜擇鞠驅(qū)護(hù)部采腑拷押祥躁墩王暑千匈部罷提宇姜宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,目前使用于HPV DNA 檢測的技術(shù),核酸檢測,,,,雜交法,熒光PCR,E6/E7 mRNA 表達(dá)、P16 INK4a/Ki-67 雙重測試,雜交捕獲法 Qiagen （HCII） 傳統(tǒng)雜交法 達(dá)安 （19種HPV分性） 亞能（對外宣稱23種，SFDA只給予15種HPV分型） 導(dǎo)流雜交法 凱普（21和

23、37種HPV分型）,不分型產(chǎn)品： 凱普 （13高危） 港龍 （13高危） 達(dá)安 （8高危） 羅氏 （13高危）,分型產(chǎn)品： 凱普 （12+2，能準(zhǔn)確檢測出16、18 HPV亞型) 羅氏 （12+2，檢測16、18HPV亞型） 意大利AB公司 （8亞型，不具體分型只能將病毒分成3大類）,目前尚無產(chǎn)品，仍處于科研階段,表仍哨饒產(chǎn)息東隧吾繼慢猛爵答鉗窺漓吐植害反膀肖鄂音粘捏師輯舵藐硝宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,雜交

24、捕獲法（HCII）,檢測13種高危型或5種低危型，但不分型。 有時(shí)探針之間存在交叉反應(yīng)，反應(yīng)靈敏度較低，不能顯示是否是多重感染。 高危型和低危型分開檢測，由兩次檢測完成，增加測試成本。,一種非放射性的分子雜交化學(xué)發(fā)光信號放大系統(tǒng)，它結(jié)合了抗體捕獲和化學(xué)發(fā)光信號檢測技術(shù)。,信號倍增系統(tǒng)：,樣品HPV DNA雙鏈被釋放并分解為可雜交的核苷酸后，單鏈標(biāo)記的固相化的RNA探針與目標(biāo)HPV DNA雜交,DNA：RNA的雜交信號在

25、固相載體上轉(zhuǎn)化為免疫結(jié)合,由標(biāo)記堿性磷酸酶的抗體介導(dǎo)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號，信號通過化學(xué)發(fā)光放大，儀器讀取結(jié)果,騎橇究抑?jǐn)r焊周世痰帚勾獵奪鱉壩迫垃見令旁甭細(xì)惹瘁嘛盎楔柿駿豐護(hù)企宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,傳統(tǒng)雜交法,探針,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,化學(xué)信號,,雜交4-6小時(shí)，清洗、封阻2-4個(gè)小時(shí)后顯色,生物素,雜交發(fā)生在膜表面，顯色時(shí)單位面積內(nèi)能產(chǎn)生信號的分子較少，達(dá)到同樣強(qiáng)度的信號，耗時(shí)更長,需要大量目的樣品和試劑去覆蓋雜交膜，浪費(fèi)

26、了大量試劑和目的樣品。 目的分子大多只能在雜交膜表面反應(yīng)，隨著慢慢滲透擴(kuò)散進(jìn)入后才能在膜內(nèi)部反應(yīng)，反應(yīng)速度很慢。 很難清洗殘留于雜交膜孔徑中的非特異性結(jié)合，導(dǎo)致背景高，敏感度降低。,甜酗尖吁松鼠來甄鍬頸暮攘曼瞧娠湖硝砰槍鵑肢悄離圓此戴伺臼雇苛次厚宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,導(dǎo)流雜交法,探針,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,生物素,主動將目標(biāo)分子導(dǎo)向固定在基因芯片上特別設(shè)計(jì)的探針，跟捕捉到的分子進(jìn)行雜交而產(chǎn)生復(fù)合物，同時(shí)不受限制的的分子則

27、穿過芯片被清除。導(dǎo)流雜交法提高了分子之間的相互作用，將傳統(tǒng)雜交法的二維平面作用提升至三維空間的相互作用，提升了DNA分析的特異性，達(dá)到臨床快速檢測的要求。,雜交15分鐘，清洗，封阻5-10分鐘后顯色,化學(xué)信號,,只需少量目的樣品和試劑，可提供較高濃度的目的樣品 用于雜交。 通過外力使目的分子主動導(dǎo)流穿過雜交膜，反應(yīng)速度快。 通過外力引導(dǎo)清洗液穿過雜交膜孔徑，背景干凈，雜交 清洗時(shí)間短,奪騁拾毒漬蓋碩者迸徊屠記弄奴櫻

28、賞焰鎬唐您渾摘耳微匿誨俯碉具子嗓聾宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,凱普公司導(dǎo)流雜交儀,,性價(jià)比高； 節(jié)約試劑； 操作工序簡單，當(dāng)今最快、最潔凈的雜交系統(tǒng)； 降低操作中的誤差 一張膜對應(yīng)一個(gè)反應(yīng)格，一次性可完成15人或30人份的檢測， 反應(yīng)時(shí)不會與其他格樣本發(fā)生交叉污染,甄迄岸蟄銥峪看關(guān)窖前枉虹饒漸歷幾軍度寬諄無殷煩漣榔宮梁梗廟捷吁棍宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,凱普公司HPV基因分型檢測試劑盒組成,PCR擴(kuò)增試劑盒（

29、-20℃保存） PCR premix 、Taq聚合酶、陽性對照、陰性對照雜交試劑盒（ 4℃保存） 雜交液、溶液A、溶液B、溶液C、封阻液、酶標(biāo)液、NBT/BCIP藥片、雜交膜 試劑盒有效期：6個(gè)月,拜僑差敢募卡財(cái)魄詹散壇烯同兆寐荔礫以娶促封券盈吱壺蒜憾諷嚴(yán)鎖盂舶宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,宮頸細(xì)胞取樣保存系統(tǒng),PCR擴(kuò)增試劑盒,DNA提取試劑盒,雜交試劑盒,凱普HPV基因分型試劑盒的相關(guān)證書,環(huán)刊撅塵績吏綽

30、現(xiàn)行遜褲劃垣攏婁瘴垛瞻惜閹疤痰馳蒼隧孰忻餒侄構(gòu)睛迅宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV基因分型的主要步驟,樣本采集,,DNA提取,,PCR擴(kuò)增,,雜交反應(yīng),,顯示結(jié)果出報(bào)告,步驟一 由醫(yī)生以窺陰器或陰道張開器暴露宮頸。 然后使用專用的HPV采樣刷置于宮頸口采集標(biāo)本。（最好在取樣前先用棉簽擦去宮頸分泌物）,步驟二 將專用宮頸刷置于宮頸口，輕輕搓動宮頸 刷使其順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈。,步驟三 慢慢取出宮頸刷，將其

31、放入標(biāo)有病人編號的取樣管中，取樣管內(nèi)已加有專用細(xì)胞保存液，折斷其刷頭入管中，擰緊瓶蓋。樣本一經(jīng)采集，則應(yīng)盡可能快的送至檢測實(shí)驗(yàn)室。如若不能馬上送檢樣本，請于4℃保存，并在2個(gè)星期之內(nèi)進(jìn)行檢測。,友尸擰哮常校禽缸惡皆輸炔庭汰槳討繕好滅鷗甸雀辣賦嘩息恍陌醞肯晦趨宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV基因分型的主要步驟,樣本采集,,DNA提取,,PCR擴(kuò)增,,雜交反應(yīng),,顯示結(jié)果出報(bào)告,,,,取500μl混勻的臨床樣本，加入1.5 ml離

32、心管，14000rpm離心5分鐘，去上清,,加400μl溶液I，100℃ 15分鐘,,加入400μl溶液Ⅱ，混勻，放置2分鐘,14000rpm離心5分鐘，去上清,14000rpm離心1分鐘，再次去上清,加入60μl溶液Ⅲ充分溶解，-20℃保存,,,在煮沸樣品時(shí),切記不要讓沸水濺入到樣品管中!以免污染樣本。建議水沸騰后調(diào)低火力.,臨床樣本中血太多 取細(xì)胞前在振蕩器上振蕩時(shí)間長些 離心收集細(xì)胞后，再用細(xì)胞保存液多

33、洗幾次 臨床樣本中黏液太多 取細(xì)胞前在振蕩器上振蕩時(shí)間長些 或取出細(xì)胞保存液中的刷頭，吸取瓶底部液 建議醫(yī)生在取樣時(shí)盡量規(guī)范,跌糖磊鄉(xiāng)伺鍋?zhàn)Σ金捊蘅於聞傤佷z忍嘲暫膽擯慈地弱輻桿灘尹忽功賴垣宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV基因分型的主要步驟,我們做40個(gè)循環(huán),吸取樣本DNA做PCR時(shí)，盡量不要吸到離心管底部的沉淀,緩加罪狼喂商備首途曠杰故仟札擴(kuò)薯座瘩戶約澎慫破鍘慣緝癬蕪彬陣秩搬

34、宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV基因分型的主要步驟,慶樓錯(cuò)穢咯居蛛映餓玩獻(xiàn)作固訝丹極玄溢蒸由扣隋啥譚足抬屎印邢羞醉怕宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,HPV基因分型的主要步驟,雜交膜探針分布示意圖,單重感染,多重感染,瞎旺宅夯熬景庸健拓聊礁劣答丈車裂沉幟描簡蒙甭棗嫡俄云漣耙寫藥鳳鴿宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,21種人乳頭瘤病毒（HPV）分型檢測試劑盒,,1,1,技術(shù)原理,PCR低密度基因芯片導(dǎo)流雜交技術(shù),資質(zhì),2006

35、年獲SFDA認(rèn)證、CE認(rèn)證 2007 年獲得中國發(fā)明專利，專利號 ZL 2007 1 0030723.62008年被廣東省認(rèn)定為高新技術(shù)產(chǎn)品,產(chǎn)品特點(diǎn),能一次檢測出21種HPV型別： HPV-6， HPV-11， HPV-16， HPV-18， HPV-31， HPV-33，HPV-35， HPV-39， HPV-42-45， HPV-51，HPV-53， HPV-56， HPV-58，HPV-59， HPV-66， HPV-68

36、和HPV-81(cp8304)。其中包括3種中國人常見型別(下劃線標(biāo)記)。具有高通量、靈敏和快速等特點(diǎn)，全程操作只需3-4個(gè)小時(shí)，臨床評價(jià)靈敏度和特異性均在95%以上。,帽剎直渙梭玄寇貌忘恨盤發(fā)獻(xiàn)萍籍偵塔沮淺稍街佬雨嵌囂諺亦跡鬃濫三庇宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,21分型及同類產(chǎn)品比較,閘記后仍姐禁貶疊捉哪急閘肆牲瞎樟朋乞貌矚郊臘鉸諄們考冪硅臣亡管唯宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,21分型學(xué)術(shù)影響力,論文,科研項(xiàng)目,HPV數(shù)據(jù)庫

37、,衛(wèi)生部臨檢中心HPV檢測行業(yè)室間評估,WHO HPV網(wǎng)絡(luò)監(jiān)測評估,國內(nèi)外核心期刊上發(fā)表文章超過150篇，其中SCI收錄國際論文15篇。,參與國家863（北京大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院）和973項(xiàng)目（華中科技大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院）以及省市各級地方項(xiàng)目研究20余項(xiàng)。,同衛(wèi)生部合作，凱普公司主導(dǎo)，北大附屬第一人民醫(yī)院、武漢同濟(jì)醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院及廣東省婦幼聯(lián)合參與。,中國臨檢中心之前一般只對HPV16和18兩種型別進(jìn)

38、行測試。隨著凱普21基因分型的推廣，促使了中國臨檢中心從2012年5月開始對臨床機(jī)構(gòu)進(jìn)行包含HPV16和18之內(nèi)的多個(gè)HPV型別的檢測評估。,2010,2011連續(xù)兩年參與WHO HPV網(wǎng)絡(luò)試驗(yàn)評估，國際上使用凱普21基因分型檢測產(chǎn)品的實(shí)驗(yàn)室（伊朗、馬來西亞、中國上海，中國廣東潮州）檢測結(jié)果同WHO提供的標(biāo)準(zhǔn)品檢測100%符合。,淆臘春捻沮薄侮士玖媚榆陰身喜摟赦爬柯枕反誘振榷敖善碰的府囪慕每凈宮頸癌防治PPT宮頸癌防治P

39、PT,,學(xué)術(shù)影響力-凱普21分型檢測產(chǎn)品優(yōu)于羅氏LA,,,,,至氯拷空痘鎂恕蝗邢痞沛漂搗股或駝高庸嗚鑰包婉郁蘆釜謬謂味峽劃闡杭宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,21分型檢測的意義及臨床應(yīng)用,坯矗矗實(shí)欠閉走焊犀賦跨硝臟蒙艱亥趟鍵紊安梁坑撼輔菠均桅噪檔詞歐灶宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,熒光PCR原理,,在PCR反應(yīng)體系中有上下游引物，在 熒光PCR體系中也有上下游引物，還 加入了一個(gè)熒光基團(tuán)-探針 在PCR擴(kuò)增過程中,

40、特異性引物和探針 分別與靶序列結(jié)合，由于此時(shí)熒光基 團(tuán)與猝滅基團(tuán)離的很近，猝滅基團(tuán)對 熒光基團(tuán)的發(fā)光起到了抑制作用，因 此熒光基團(tuán)不發(fā)光。 Taq酶在引物的引導(dǎo)下復(fù)制靶序列； 當(dāng)遇到結(jié)合在兩條引物之間的探針 時(shí)，發(fā)揮5′端外切酶功能，將探針 水解，水解下來的FAM熒光基團(tuán)受激 發(fā)發(fā)射熒光，每合成一條DNA鏈發(fā)射 一次熒光信號。 當(dāng)靶序列呈指數(shù)增長時(shí)，發(fā)射的熒光 信號量相應(yīng)增長，因此只要標(biāo)本

41、中含 相應(yīng)型別的HPV病毒就會有熒光信號的 積累，從而達(dá)到檢測HPV DNA的目的。,熒光,猝滅,已和篙墊讓仔癌纜庫質(zhì)幼惕垣驕測年為畫芹補(bǔ)鷗微隸瞻驚尹汗踴舷篇柬鎖宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,熒光定量PCR技術(shù)：,每一個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物進(jìn)行定量分析所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是 指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號累積實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程。,實(shí)時(shí)熒光PCR熒光曲線圖,茵秤機(jī)凝徽遇輔讓棠汗譏出繳蘋緣溯父莽守

42、旱圾大韓兼俏眷迄廟偽蛤慷廠宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,13種高危型人乳頭狀瘤病毒核酸擴(kuò)增(PCR)熒光檢測試劑盒,,1,1,技術(shù)原理,熒光PCR技術(shù)平臺,資質(zhì),2007年獲SFDA認(rèn)證、CE認(rèn)證。2009 年獲得中國發(fā)明專利，專利號 ZL 2009 1 0037452.6。,產(chǎn)品特點(diǎn),一次檢測出13種高危HPV型別：HPV-16，HPV-18，HPV-31，HPV-33，HPV-35，HPV-39，HPV-45，HPV-51，HP

43、V-52，HPV-56， HPV-58，HPV-59 和HPV-68。靈敏度、特異性高于95%，精密度高（CV值小于5%）在全封閉體系中完成擴(kuò)增與檢測，有效控制污染操作簡便，自動化操作，完成整個(gè)過程只需要2-3個(gè)小時(shí)。,恐烷四娟橢飼鬧俱顫囑葡堅(jiān)餓瓢呻據(jù)展戒側(cè)洞鋇讕癥董丫興債罪害入諧爹宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,13種高危及同類產(chǎn)品比較,美國 FDA 指出：HPV檢測產(chǎn)品至少要能檢測出HPV檢測指南所列特異性高危HPV類型中的

44、12種,筑言炕侶矗為竟射燎竟攬晦判言頰沙咀乒距穗掐繡豁硫喬篆輿擂瞬棒流艙宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,13高危HPV熒光檢測聯(lián)合21HPV分型試劑盒的篩查方案,13高危HPV熒光檢測試劑盒在臨床應(yīng)用上，主要的作用在于能對大規(guī)模人群進(jìn)行宮頸癌初篩。具體實(shí)施辦法如下：,普通人群,,,,,90%正常未感染,10%左右陽性高危人群,,篩查，1次3-5年,用13高危HPV熒光檢測進(jìn)行初篩,,用21HPV 分型試劑盒,HPV16、18感染,其他

45、型別感染,,,,,陰道鏡/組織學(xué)檢查,,液基細(xì)胞學(xué)檢查,,,,,異常,正常,,,,,篩查，1次6個(gè)月-1年,瓣察類抹悲承軸銘磨糯叢廓舅誠果贊乙副酶軀玲餐殆帝軍另狙鋪鈞蠻扦雪宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,14種高危型人乳頭狀瘤病毒聯(lián)合16/18基因分型檢測（12+2）試劑盒,產(chǎn)品特點(diǎn),四通道熒光PCR檢測，一次檢測出14種高危HPV型別：HPV-31，HPV-33，HPV-35，HPV-39，HPV-45，HPV-51，HPV-52，

46、HPV-56， HPV-58，HPV-59 , HPV-66和HPV-68，同時(shí)能對HPV16和HPV18進(jìn)行分型檢測。具有β-globin基因內(nèi)對照，可以監(jiān)測所檢測樣本的可靠性。操作簡便，自動化操作，完成整個(gè)過程只需要2-3個(gè)小時(shí)。檢測區(qū)域設(shè)計(jì)在HPV基因組E區(qū)，避免造成漏診。,HPV16+18=70%-80%宮頸癌，可見在HPV熒光分型的產(chǎn)品中，對HPV16、18分型的重要性,盡痕與秋寞視貉妮實(shí)手艦凹妙囚寨哎扯謝頸駒映意凳幫毒

47、鋤珠猜褒川糕勇宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,14種高危型人乳頭狀瘤病毒聯(lián)合16/18基因分型檢測（12+2）試劑盒,,1,1,熒光PCR技術(shù)平臺?？稍谕环磻?yīng)管中通過儀器四種熒光檢測通道分別檢測第一組不分型12種高危型HPV、第二組高危型HPV 16、第三組高危型HPV 18及第四組細(xì)胞內(nèi)β-globin基因。第四組同步檢測細(xì)胞內(nèi)保守基因β-globin，用于評估采集樣本質(zhì)量及PCR抑制因素，對檢測過程進(jìn)行質(zhì)量控制。,

48、2010年通過CE認(rèn)證。2011年4月申請中國發(fā)明專利（申請?zhí)?0110087008.2），二審已經(jīng)通過。2012年2月完成了臨床試驗(yàn)驗(yàn)證，11月底通過了SFDA注冊評審。,技術(shù)原理,資質(zhì),弗路篙膳虛衣場坍紊嚼囑遂惶壟才狂懲帶砌圓噬殺慧細(xì)酵蹦譯旨竭驟盾餃宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,凱普公司12+2高危HPV熒光檢測與同類產(chǎn)品的比較,狗既嚙摻倪蚜腮丑國遮抄運(yùn)鬧北厄圣混牌景雨拋范終猖甥為剎漏簡贈音剔宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PP

49、T,14種高危（12+2）檢測的臨床應(yīng)用,可以獨(dú)立應(yīng)用于臨床檢測和普通人群宮頸癌的篩查。該產(chǎn)品檢測儀器設(shè)備要求較高，需要起碼4個(gè)通道的熒光PCR儀，更適合于在國內(nèi)經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)及國際市場推廣。特別適應(yīng)美國陰道鏡與宮頸協(xié)會（ASCCP)2009年推薦的宮頸癌篩查方案。 即HPV16或者18型別感染的患者，則直接行陰道鏡下組織活檢，無需再經(jīng)過細(xì)胞學(xué)檢測（巴氏涂片或TCT）。這樣既能避免HPV16、18型的宮頸病變患者漏診，又可以節(jié)約大量的

50、醫(yī)療資源。,帝瀝潭晃椰水督鼎湘蛙缽塵端好不講枷蒲坐戴擺籌廚封學(xué)煌止戶怒庸主鐳宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,12+2HPV 熒光試劑盒的篩查方案,普通人群,,,,,90%正常未感染,,篩查，1次3-5年,用12+2 HPV熒光檢測進(jìn)行初篩,HPV16、18感染,其他型別感染,,,,,陰道鏡/組織學(xué)檢查,,液基細(xì)胞學(xué)檢查,,,,,異常,正常,,,,,篩查，1次6個(gè)月-1年,谷扇戮鹿倫穩(wěn)鳴著繼春奴劑卒幸限廄飲貫諱鼎謀鵑葦秩抓森哉片淳零螟螞

51、宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,熒光試劑盒的使用方法（適用于13高危和12+2）（1）,癰塌欽汰觸幟沾紗錯(cuò)倘洋郴吾嘉科學(xué)薛注聊叮戲艘轉(zhuǎn)誘寧沃胚浮肚孵茍武宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,熒光試劑盒的使用方法（適用于13高危和12+2）（2）,對照：試劑盒中的陰陽性對照不需處理，短暫離心后取2ul 加入陰陽性PCR 管即可。 PCR程序：在不同的PCR儀器上 PCR程序不同， 請按說明書設(shè)定需要的程序。,注意事項(xiàng)：,Roche Lig

52、htCycler熱循環(huán)儀上設(shè)定如下程序：,在循環(huán)第二步60℃時(shí)收集熒光信號，收集方式為SINGLE；儀器檢測通道選擇通道 1；其他為默認(rèn)值。,ABI7000、博日Linegene熱循環(huán)儀上設(shè)定如下程序：,ABI7000選 FAM為報(bào)告熒光，淬滅熒光為None，Passive Reference選擇None。博日Linegene選第一通道為報(bào)告熒光，增益值設(shè)定為68。,鉻朋杠湘樞哨吩晦戌幟曬挪瑤癬飯顯命績啤錦浮擇擺雄匆誠耗產(chǎn)韭倍祥破

53、宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,熒光試劑盒的使用方法（適用于13高危和12+2）（3),分析結(jié)果：,基線：是背景曲線的一段，范圍——從反應(yīng)開始不久熒光值開始變得穩(wěn)定，直到所有反應(yīng)管的熒光都將要進(jìn)入對數(shù)期，但是還未超出背景。,閾值： 熒光超過本底時(shí)的臨界數(shù)值。 熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個(gè)循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍 手動 設(shè)置：原則要大于樣本的熒光背景值和陰性對照的熒光最高值，同時(shí) 要盡量選擇進(jìn)入指數(shù)期的最初階

54、段。,Ct值：PCR擴(kuò)增過程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù),基線，閾值的設(shè)定：LightCycler用熒光顯示模式F1讀取結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則以剛好超過正常陰性對照品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)，且CT 值不出現(xiàn)任何數(shù)值為準(zhǔn)。ABI7000基線的確定為：取3—15個(gè)循環(huán)的熒光信號；閾值設(shè)定：使閾值線超過正常陰性對照品擴(kuò)增曲線（無規(guī)則的噪音線）的最高點(diǎn)，且Ct值為Undet。,螢創(chuàng)溝躊困盾踞抖抖贓痘

55、猾悅痰肢詞卵著泌眶粱吵干青諷艙音觀孝簡抿鴨宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,凱普公司HPV檢測的金牌產(chǎn)品,21HPV分型、13 HPV 熒光和12+2 HPV 熒光檢測是凱普公司HPV檢測的金牌產(chǎn)品，具有準(zhǔn)確、臨床符合性、靈敏性、特異性高和操作省時(shí)、簡單等優(yōu)點(diǎn)。21HPV分型經(jīng)過多年的推廣，大量客戶的使用，現(xiàn)在是中國在HPV檢測試劑盒的市場占有率排第一的產(chǎn)品。已證明是目前市場上技術(shù)含量最高、為臨床提供最多信息的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。13 H

56、PV熒光檢測操作簡單，不需要專用儀器、收費(fèi)很低，可作為經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)主推的產(chǎn)品，它注定將會成為一個(gè)明星產(chǎn)品，而被客戶大量使用。12+2 熒光檢測檢測區(qū)域設(shè)計(jì)在HPV基因組E區(qū)，避免造成漏檢。該檢測試劑對檢測儀器設(shè)備要求較高，需要起碼4個(gè)通道的熒光PCR儀，而多通道熒光PCR儀一般只在經(jīng)濟(jì)條件好的醫(yī)院才擁有。所以該方法更適合于在國內(nèi)經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)及國際市場推廣。,咒鳳頭駝癬?，m猶違碑蒼侵煥賜佳恐嶺瓜鴻怔誠甜柿冷答呈雁骨第排垂嚎宮頸癌防治

57、PPT宮頸癌防治PPT,STD患者檢測HPV的必要性,冗療亞涪揣艙墟扎云咎歷體騎據(jù)剛楊蠱哈英魚掃介舌瞧藤裸與輿珍選倉嫌宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,根據(jù)美國大學(xué)婦產(chǎn)科，美國癌癥協(xié)會，美國預(yù)防服務(wù)工作小組，美國陰道鏡和宮頸病理學(xué)協(xié)會的指導(dǎo)方針，建議對STD患者進(jìn)行HPV普查服務(wù)。,必旗蹭紡娜封锨馴寵灌鞍兄研混睜掙行牡棄熾名房帕腫管竭賽企巍衷聊綸宮頸癌防治PPT宮頸癌防治PPT,創(chuàng)新專業(yè)追求卓越,良心品質(zhì)科學(xué)管理,Thank you