青蒿琥酯抑制人結腸癌細胞的生長及其機制的初步研究.pdf

1、青蒿素是從黃花蒿中提取的有效抗瘧成分，臨床上用于治療惡性瘧和腦型瘧。青蒿琥酯(ART)是其具有過氧化橋的倍半萜內(nèi)酯類衍生物，具有水溶性好、抗瘧活性高等特點。近年來，有人報道青蒿琥酯具有體內(nèi)外抗腫瘤作用。目前實驗已經(jīng)證實青蒿琥酯對腫瘤細胞有抑制作用，可以殺傷腫瘤細胞，并且與傳統(tǒng)化療藥不存在交叉耐藥。但是具體抗癌機制不明，進一步研究其抗癌機制，有助為臨床抗癌藥物開發(fā)打下基礎。 本研究選擇人結腸癌高轉移細胞株SW620和低轉移細胞株S

2、W480作為對象，應用MTT法檢測青蒿琥酯對細胞增殖活性的影響；采用流式細胞術測定結腸癌細胞的凋亡；并且用RT-PCR技術對青蒿琥酯作用SW620細胞前后VEGF的mRNA的改變作了研究。初步探討了青蒿琥酯對結腸癌細胞株的體外抑制作用及其抗腫瘤的機制。 實驗方法: 1.細胞培養(yǎng)及增殖能力檢測 細胞株SW480和SW620在37℃、含5％C02、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。對數(shù)生長期的細胞接種于96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24

3、h后加入適當濃度藥物，使終濃度分別為10、20、40、60、90μg/ml。分別培養(yǎng)24、48h，在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔光吸收值(OD值)，以OD值表示結腸癌細胞增殖程度并計算細胞增殖抑制率。 2.流式細胞術測定各處理組的細胞凋亡率 取對數(shù)生長期的SW480和SW620細胞，20、40μg/mlART作用細胞48h，正常生長的細胞作為對照。分別收集各組細胞(大于106)，加冷70％乙醇固定，4℃過夜。分別加入碘化丙錠

4、(PI)染色液，1h后流式細胞儀檢測。CellQuest軟件進行數(shù)據(jù)分析。 3.RT-PCR檢測ART對結腸癌SW620細胞的VEGFmRNA表達的影響 選取VEGF高表達的SW620細胞作為研究對象，ART作用48小時后按Trizol試劑盒說明一步法提取總RNA，用紫外線分光光度計測定RNA的純度并定量。取總RNA行逆轉錄，然后再進行PCR反應，反應產(chǎn)物在1.5％瓊脂糖凝膠上電泳，應用凝膠掃描儀分析電泳帶的光密度，并以

5、β-actin校正做相對量分析，數(shù)值以兩者的相對光密度比值表示。 4.統(tǒng)計學分析 所有定量分析實驗均重復三次，用SPSS13.0forWindows統(tǒng)計軟件包統(tǒng)計分析，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。 實驗結果： 1.不同濃度的青蒿琥酯對人SW480和SW620細胞株的增殖都具有明顯抑制作用，隨著作用時間的延長，藥物濃度的增加，其抑制作用也增加。 2.經(jīng)流式細胞儀分析青蒿琥酯處理后的結腸癌細胞，

6、熒光直方圖中顯示各藥物濃度作用的SW480和SW620細胞Go/G1期峰前均出現(xiàn)亞二倍體峰，藥物處理組比對照組的凋亡率升高，有統(tǒng)計學意義。20μg/ml、40μg/ml的ART作用于SW480和SW620細胞48h后，細胞凋亡率分別為8.6±1.09％、11.49±0.61％和6.16±0.57％、13.08±1.06％。而對照組SW480和SW620細胞的凋亡率只有0.47±0.02％和0.86±0.06％。 3.RT-PCR