CD40L對人結腸癌細胞HCT-116生長抑制作用及其機制的實驗研究.pdf

1、目的：研究CD40L對體外培養(yǎng)的人結腸癌HCT-116細胞株增殖和凋亡的影響，并探討其作用機制。
　　 方法：采用不同濃度（0.1ug/ml、0.5ug/ml、1.0ug/ml、2.0ug/ml、3.0μg/ml）的CD40L處理處于對數生長期的結腸癌HCT-116細胞，倒置顯微鏡觀察細胞生長情況，MTT比色法測定計算各實驗組和對照組細胞的生長抑制率，流式細胞術（FCM）檢測CD40L對HCT-116細胞周期和細胞凋亡的影響，R

2、T-PCR.半定量法檢測VEGF、bcl-2及fasmRNA的表達水平，Western Blot法測定腫瘤細胞中細胞內VEGF、Bcl-2及Fas蛋白的表達情況。
　　 結果：（1）MTT法顯示一定濃度的CD40L可抑制HCT-116細胞增殖，抑制作用呈時間和劑量依賴性，實驗組與對照組及各實驗組之間比較均有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。（2）FCM結果顯示，HCT-116經CD40L作用48小時后，細胞有明顯凋亡，且隨濃度的增加和

3、作用時間延長而增強，G2/M期細胞比例上升，G0/G1期細胞比例下降，呈劑量依賴性（p<0.05）。（3）RT-PCR法顯示，HCT-116細胞的fas mRNA隨CD40L濃度增加而表達增加，VEGF、bcl-2 mRNA隨藥物濃度增加表達下降（p<0.05）。（4）Western Blot法結果顯示，隨著不同濃度的CD40L處理48h后，HCT-116細胞中VEGF、Bcl-2蛋白表達下降，Fas蛋白表達升高（p<0.05）。