詹森桿菌紫色桿菌素優(yōu)化鑒定及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的作用.pdf

1、詹森桿菌紫色桿菌素優(yōu)化鑒定及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞詹森桿菌紫色桿菌素優(yōu)化鑒定及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT29的作用的作用OptimizationIdentificationofViolaceinbyJanthinobacteriumlividumItsEffectontheColonCancerCellHT29學(xué)科專業(yè)：食品科學(xué)研究生：許嫚指導(dǎo)教師：韓燁副教授天津大學(xué)化工學(xué)院二零一五年五月摘要摘要紫色桿菌素(violacein，Vio)是由微生物產(chǎn)生的

2、一種次級(jí)代謝產(chǎn)物，屬于吲哚衍生物，由兩個(gè)色氨酸分子氧化縮合而成。具有抗原生動(dòng)物、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等多種生物活性。本研究以詹森桿菌（JanthinobacteriumlividumZSJ）為出發(fā)菌株，對(duì)其發(fā)酵條件及結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29的作用進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下：1.對(duì)詹森桿菌ZSJ發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，培養(yǎng)基組分為：麥芽糖1.25gL，胰蛋白胨9.5gL，牛肉浸膏2.5gL，色氨酸1.25gL；發(fā)酵條件為：初始p

3、H值6，接種量7%，裝液量50mL250mL時(shí)，紫色桿菌素產(chǎn)量最高，為2.87gL，較原產(chǎn)量2.13gL增長了34.7%。2.采用16SrDNA法對(duì)分離得到的菌株進(jìn)行鑒定，確定出發(fā)菌株與JanthinobacteriumlividumBR01同源性為99%，屬于詹森桿菌屬。采用高效液相色譜、紫外可見光譜、核磁共振氫譜等方法對(duì)提取到的藍(lán)紫色素進(jìn)行分離鑒定。結(jié)果表明，該藍(lán)紫色素由脫氧紫色桿菌素和紫色桿菌素兩部分組成，比例約為1：9，可見光下

4、最大吸收波長分別為565nm和584nm。3.對(duì)紫色桿菌素的粗提物進(jìn)行光、酸堿、熱、溶解性及顏色和金屬離子對(duì)色素穩(wěn)定性進(jìn)行研究研究。結(jié)果表明，該藍(lán)紫色素?zé)岱€(wěn)定性良好；對(duì)酸堿穩(wěn)定性較好，pH值超過12以后出現(xiàn)明顯的顏色及吸光值變化；對(duì)光照較為敏感，直射光下呈現(xiàn)褪色現(xiàn)象。4.研究紫色桿菌素對(duì)HT29的作用。結(jié)果表明，紫色桿菌素對(duì)細(xì)胞生長抑制作用呈時(shí)間、劑量依賴性，與同劑量5氟尿嘧啶比較，具有更明顯的抑制效果，最高抑制率達(dá)90%以上；光鏡及電

5、鏡均顯示出紫色桿菌素作用后的細(xì)胞呈現(xiàn)出空泡結(jié)構(gòu)，濃度越大空泡結(jié)構(gòu)越多；凋亡現(xiàn)象發(fā)生在晚期，與藥物濃度和作用時(shí)間呈正相關(guān)。5.采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究紫色桿菌素作用后HT29中差異蛋白情況。結(jié)果表明，紫色桿菌素高劑量組作用后差異蛋白數(shù)為492個(gè)，低劑量組為112個(gè)，5氟尿嘧啶組為336個(gè)。差異蛋白主要富集在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及翻譯過程，分布在細(xì)胞質(zhì)、離子體膜及核酸上，主要富集在與結(jié)合功能相關(guān)的蛋白上。差異蛋白共參與了50條信號(hào)通路，最主要的通路為轉(zhuǎn)錄