龍葵堿在結腸癌HT-29細胞雞胚移植模型中抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的:
　　通過建立人結腸癌 HT-29細胞雞胚移植模型，研究不同劑量龍葵堿對人結腸癌HT-29細胞誘導的腫瘤血管生成及腫瘤增殖的影響，為龍葵堿抗腫瘤作用提供理論及實驗依據(jù)。
　　方法:
　　選取孵育至9天雞胚，把制備的雞胚絨毛尿囊膜（Chicken embryo villus allantois membrane，CAM）分為對照組和實驗組（分別加低、中、高三種不同劑量龍葵堿）(n=10)，將培養(yǎng)的人結腸癌細胞系HT

2、-29細胞接種到CAM后第二天，實驗組分別加入劑量150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml的龍葵堿，對照組加入等量的磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffered Saline，PBS）液，每天觀察細胞移植瘤及血管生長特性；5天后通過立體顯微鏡照相、Image-pro plus6.0圖像分析軟件分析圖片，收集數(shù)據(jù)，觀察實驗組與對照組血管新生面積變化；采用免疫組織化學方法，檢測移植瘤中CD34抗原標記的腫瘤微血管密度（mi

3、crovessel density，MVD）和ki-67抗原表達指數(shù)反應腫瘤增殖，收集數(shù)據(jù)。觀察不同劑量的龍葵堿對腫瘤血管生成及腫瘤增殖的影響。
　　結果:
　　HT-29細胞接種到CAM第3～5天，大量血管向瘤體集中生長，部分長入或跨越瘤體表面，腫瘤也迅速生長。給藥后第5天進行拍照，圖像分析，定量計算不同劑量龍葵堿給藥后腫瘤血管新生面積分別為（13.21±0.89）、（11.53±0.82）、（8.92±0.79），明顯低

4、于PBS對照組（22.91±1.45），且呈劑量依賴性，上述各組間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。免疫組織化學檢查不同劑量龍葵堿給藥組的移植瘤微血管密度分別為（24.45±3.86）、（20.3±3.68）、（16.4±3.51），明顯低于PBS對照組（37.83±4.03），與血管新生面積表現(xiàn)相一致，且與龍葵堿劑量呈負相關（r=-0.789）（P<0.01）；ki-67抗原表達指數(shù)逐漸下降（34.12±3.48）、（28.24±3.