肝素酶在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)及對(duì)肺癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移潛能的影響.pdf

1、肺癌是全世界發(fā)病率最高的惡性腫瘤，已成為人類癌癥死亡主要原因。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占肺癌新發(fā)病例的75-80％，雖然各種治療手段不斷改善但其預(yù)后依然很差。侵襲和轉(zhuǎn)移是肺癌重要的生物學(xué)特征和影響生存率的主要因素。因此需要敏感而特異的指標(biāo)來預(yù)測(cè)患者病變的侵襲、轉(zhuǎn)移性，指導(dǎo)患者接受更恰當(dāng)?shù)姆暖?、化療措施并預(yù)示腫瘤發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的可能性。 肝素酶是一種葡萄糖苷內(nèi)切酶，它能夠裂解細(xì)胞基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)中的硫酸乙酰肝素蛋白多糖核心分子

2、上的硫酸肝素，破壞細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜結(jié)構(gòu)的完整性，直接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移；肝素酶還可激活并釋放結(jié)合在乙酰肝素上的生長(zhǎng)因子如堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，間接誘導(dǎo)腫瘤血管生成，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。文獻(xiàn)報(bào)道在多種惡性腫瘤中肝素酶的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能和患者的不良預(yù)后密切相關(guān)，因此研究肝素酶與肺癌的關(guān)系可能有一定臨床指導(dǎo)意義，但現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)肝素酶的表達(dá)在不同的惡性腫瘤中生物學(xué)作用并不一致，而針對(duì)NSCLC中肝素酶的表達(dá)及其

3、生物學(xué)作用的研究甚少，因此我們擬針對(duì)肝素酶在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)及對(duì)其侵襲、轉(zhuǎn)移潛能的影響進(jìn)行研究。 目的：檢測(cè)NSCLC腫瘤及癌旁肺組織肝素酶轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的表達(dá)，并探討其與臨床病理特征的關(guān)系；構(gòu)建人正、反義肝素酶基因真核表達(dá)載體，分別轉(zhuǎn)染低、高轉(zhuǎn)移潛能肺癌細(xì)胞，從正反兩方面驗(yàn)證肝素酶對(duì)肺癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移潛能的影響。 方法：標(biāo)本來源于48例確診為NSCLC的患者，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)癌組織和癌旁肺組織的肝素酶、VEGF的表

4、達(dá)，CD34染色進(jìn)行計(jì)數(shù)微血管密度(MVD)，應(yīng)用RT-PCR和Westernblot技術(shù)檢測(cè)肝素酶mRNA和蛋白的表達(dá)。采用基因重組技術(shù)，構(gòu)建肝素酶基因正、反義真核表達(dá)載體，并用脂質(zhì)體法將正義真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入克隆化人低轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95C、反義真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95D。半定量RT-PCR和Westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后肝素酶轉(zhuǎn)錄和翻譯水平表達(dá)的變化；應(yīng)用MTT、克隆形成技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力變化；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的

5、改變；改良Boyden小室法檢測(cè)體外細(xì)胞侵襲力的變化；裸鼠移植瘤模型觀察轉(zhuǎn)染前后肺癌細(xì)胞腫瘤形成能力和轉(zhuǎn)移潛能的改變。 結(jié)果：NSCLC癌組織中肝素酶的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平表達(dá)明顯高于癌旁肺組織，并且與組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤(rùn)、TNM臨床分期和腫瘤分化程度有密切相關(guān)(P＜0.05)，而與患者的年齡、性別和腫瘤大小無關(guān)(P＞0.05)；肝素酶的表達(dá)水平與VEGF表達(dá)(P＜0.05)和MVD(P＜0.01)密切相關(guān)；轉(zhuǎn)染反義肝素酶

6、基因后95D細(xì)胞增殖、侵襲力和腫瘤形成能力明顯受到抑制；而95C細(xì)胞轉(zhuǎn)染正義基因后細(xì)胞增殖、侵襲力和腫瘤形成能力得到明顯提升，從反面證明抑制肝素酶表達(dá)可抑制腫瘤形成和轉(zhuǎn)移潛能。 結(jié)論： 1.肝素酶表達(dá)水平可能是影響NSCLC患者預(yù)后的重要因素之一，肝素酶可能參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程； 2.肝素酶的表達(dá)水平與VEGF的表達(dá)和MVD密切相關(guān)，提示肝素酶在NSCLC的腫瘤血管形成中發(fā)揮重要作用；