HO-1在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)及其對(duì)VEGF的影響.pdf

1、目的:肺作為人體與大氣溝通的器官，經(jīng)常受到刺激性氣體、病毒、細(xì)菌、變應(yīng)原及大氣污染物等的侵襲，這些刺激易誘導(dǎo)肺產(chǎn)生活性氧類物質(zhì)而造成對(duì)肺的損傷乃至誘導(dǎo)肺癌發(fā)生，因此，肺比身體的其他器官更需要有效的防御機(jī)制及更高級(jí)的抗氧化酶，血紅素加氧酶-1(hemeoxygenase-1，HO-1)便是其中一種。HO-1也稱為熱休克蛋白-32(Hsp32)，是目前最易被誘導(dǎo)的抗氧化應(yīng)激的重要酶，是血紅素代謝的限速酶。HO-1可分解血紅素生成膽綠素、CO

2、和鐵，膽綠素隨后被膽綠素還原酶還原成膽紅素，而游離鐵與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合。HO-1與其分解代謝產(chǎn)物均有抗氧化功能，在應(yīng)激狀態(tài)下保護(hù)細(xì)胞和組織對(duì)抗應(yīng)激反應(yīng)。但是HO-1的這種細(xì)胞保護(hù)作用是沒(méi)有選擇性的，既可以保護(hù)正常細(xì)胞，又可以保護(hù)腫瘤細(xì)胞。目前對(duì)人體多種腫瘤的研究均檢測(cè)到HO-1的高表達(dá)，并且HO-1的誘導(dǎo)和表達(dá)增高與實(shí)體腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。另外，除了細(xì)胞保護(hù)作用外，HO-1還被當(dāng)做一種促血管生成酶。血管生成是新的血管在原有血管

3、基礎(chǔ)上生成的過(guò)程，在腫瘤生長(zhǎng)和擴(kuò)散中起關(guān)鍵作用，當(dāng)腫瘤長(zhǎng)到直徑超過(guò)2mm，若要繼續(xù)生長(zhǎng)必須依賴新生血管的生成，因此HO-1的促血管生成作用有助于腫瘤進(jìn)展。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)被認(rèn)為是最強(qiáng)的血管生成因子，VEGF表達(dá)水平反映了腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管構(gòu)建的水平。本研究的目的是探討血紅素加氧酶-1(HO-1)在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)及其對(duì)肺癌血管內(nèi)皮生

4、長(zhǎng)因子(VEGF)的影響和可能的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.選用肺腺癌細(xì)胞株A549和肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1為研究對(duì)象，以永生化支氣管上皮細(xì)胞株HBE為對(duì)照，三種細(xì)胞株均培養(yǎng)于37℃、5％CO2和100％濕度培養(yǎng)箱中。
　　 2.選用肺癌組織（腺癌33例，鱗癌12例）為研究對(duì)象，以癌旁正常組織為對(duì)照。
　　 3.MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性。
　　 4.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-P

5、CR)法檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和組織中HO-1和VEGF基因的表達(dá)。
　　 5.采用WesternBlotting法檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和組織中HO-1蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.三種細(xì)胞增殖情況
　　 MTT實(shí)驗(yàn)中，OD值反映細(xì)胞代謝活性，相對(duì)于HBE，A549和SK-MES-1的OD值明顯增高(P＜0.05)，而A549與SK-MES-1之間差異不明顯(P＞0.05)。
　　 2.細(xì)胞

6、株qRT-PCR結(jié)果
　　 三株細(xì)胞株中HO-1mRNA均有表達(dá)，定量分析結(jié)果示:兩株肺癌細(xì)胞株A549和SK-MES-1中HO-1mRNA較正常支氣管上皮細(xì)胞株HBE明顯增高(P＜0.05)，而且A549中HO-1mRNA表達(dá)水平比SK-MES-1高(P＜0.05);肺腺癌細(xì)胞株A549和肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1中HO-1mRNA和VEGFmRNA表達(dá)均較HBE增高(P＜0.05)，兩者之間存在線性相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)分別為1

7、.35(P＜0.01)和9.80(P＜0.01)。
　　 3.肺癌組織和正常組織qRT-PCR結(jié)果
　　 肺腺癌組織和肺鱗癌組織中HO-1mRNA均較正常組織表達(dá)增高(P＜0.05);吸煙者比不吸煙者肺癌組織中HO-1mRNA表達(dá)增高(P＜0.05);肺癌組織中HO-1mRNA和VEGFmRNA表達(dá)均較正常組織增高(P＜0.05)，兩者之間存在線性相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)為0.87(P＜0.01)。
　　 4.細(xì)胞和組織

8、中HO-1蛋白表達(dá)情況
　　 Westernblotting結(jié)果圖顯示:三株細(xì)胞株中HO-1蛋白均有表達(dá)，且在A549和SK-MES-1表達(dá)較HBE明顯增高;肺腺癌組織和肺鱗癌組織均較正常組織的HO-1蛋白表達(dá)增高。
　　 結(jié)論:
　　 HO-1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和組織中表達(dá)增高，吸煙能誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)，說(shuō)明HO-1可能與非小細(xì)胞肺癌的起因有關(guān)，并且高表達(dá)的HO-1可能在非小細(xì)胞肺癌發(fā)展過(guò)程中繼續(xù)發(fā)揮作用;HO