VE-cadherin對(duì)非小細(xì)胞肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移作用的初步研究.pdf

1、研究背景:肺癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制復(fù)雜，尚未完全明確，尋找新的作用于肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移的基因?qū)τ诜伟┑闹委熀皖A(yù)防均有著重要的意義。血管內(nèi)皮鈣粘蛋白(vascular endothelial cadherin，VE-cadherin)是特異性表達(dá)于血管內(nèi)皮的鈣粘蛋白，促進(jìn)乳腺癌、直腸癌等多種腫瘤的血管形成。我們研究小組前期發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lungcancer，NSCLC)中，VE-cadherin與腫瘤血管生成密切相

2、關(guān)，我們推測(cè)VE-cadherin在NSCLC的侵襲、轉(zhuǎn)移中起著重要作用，且目前國(guó)內(nèi)外在VE-cadherin與NSCLC侵襲、轉(zhuǎn)移作用方面的報(bào)道研究甚少。
　　研究目的:探討VE-cadherin在不同侵襲性能非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞株的表達(dá)及沉默VE-cadherin對(duì)NSCLC細(xì)胞株侵襲、遷移的影響。
　　研究方法:
　　1.通過(guò)定量PCR及western blot檢測(cè)VE-cadherin在高侵襲性能的N

3、SCLC細(xì)胞株P(guān)G、中度侵襲性能的NSCLC細(xì)胞株H1299及低侵襲性能的的NSCLC細(xì)胞株P(guān)A中mRNA及蛋白的表達(dá);
　　2.通過(guò)降低VE-cadherin的表達(dá)后探討其對(duì)NSCLC細(xì)胞株P(guān)G侵襲和遷移的影響:實(shí)驗(yàn)分干擾組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組，設(shè)計(jì)VE-cadherin-siRNA，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PG細(xì)胞，實(shí)時(shí)定量PCR法和Westernblotting法檢測(cè)VE-cadherin在各組表達(dá)量的變化，計(jì)算干擾效率;通過(guò)Trans

4、well小室基質(zhì)侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)PG侵襲的影響，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)對(duì)PG遷移的影響。
　　結(jié)果:
　　1.VE-cadherin在三種NSCLC細(xì)胞株中都有表達(dá)，其mRNA在不同侵襲性能NSCLC細(xì)胞株P(guān)G、H1299、PA的表達(dá)水平均值依次為(0.9828±0.0034)、(0.5545±0.0046)、(0.3297±0.0065)，在高侵襲性能的NSCLC細(xì)胞株P(guān)G表達(dá)最強(qiáng)，其次為中度侵襲性能的NSCLC細(xì)胞株H1299

5、; H1299與PG相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4400.07，p＜0.001)，在檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05水平上，PG、H1299與PA三組兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.000)。
　　2.VE-cadherin在三種NSCLC細(xì)胞株中都有表達(dá)，其蛋白在不同侵襲性能NSCLC細(xì)胞株P(guān)G、H1299、PA的蛋白表達(dá)水平均值依次為(0.8713±0.0092)、(0.5270±0.0022)、(0.3379±0.0505)，在高

6、侵襲性能的NSCLC細(xì)胞株P(guān)G表達(dá)最強(qiáng)，其次為中度侵襲性能的NSCLC細(xì)胞株H1299;三種細(xì)胞株的蛋白表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1896.482，p＜0.001)，在檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05水平上，PG、H1299與PA三組兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.000)。
　　3.Real-time PCR顯示，空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、干擾組的mRNA表達(dá)水平均值依次為(0.7149±0.0739)、(0.7131±0.0431)

7、、(0.2099±0.0056)，三組的mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=103.593，p＜0.001);western blot顯示，空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、干擾組的蛋白表達(dá)水平均值依次為(0.7265±0.0029)、(0.7115±0.0070)、(0.2980±0.0020)，三組的蛋白表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2856.217，p＜0.001)。在檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05水平上，三組兩兩比較，空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組的mRN

8、A及蛋白水平?jīng)]有明顯差異（mRNA水平，P=0.967;蛋白水平，P=0.0.058）;相對(duì)于陰性對(duì)照組，干擾組VE-cadherin的mRNA及蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，相對(duì)于陰性對(duì)照組，干擾組VE-cadherin表達(dá)下調(diào)約70.6％，二者的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.000)。
　　4.Transwell小室基質(zhì)侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，干擾組與對(duì)照組的侵襲細(xì)胞數(shù)分別為34.33±3.06和86.00±7.93，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t

9、=-10.522，P＜0.001)。
　　5.劃痕損傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，干擾組24h、48h、72h的遷移距離分別為890.00±55.67μm，1236.67±61.10μm，1553.00±50.33μm，對(duì)照組24h、48h、72h的遷移距離分別為900.00±66.14μm，1610.00±36.06μm，2150.00±50.00μm;對(duì)照組與干擾組的細(xì)胞遷移距離相比，24h內(nèi)沒(méi)有明顯差異(F=0.05，P=0.8246)，

10、48h和72h對(duì)照組明顯高于干擾組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(48h， F=0.71.51，P＜0.0001);72h，F(xiàn)=182.66，P＜0.0001)。
　　結(jié)論:
　　1.VE-cadherin在NSCLC細(xì)胞株的表達(dá)水平與細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān);侵襲性能越高，VE-cadheim的表達(dá)量越高。
　　2.RNA干擾可有效沉默VE-cadheim在NSCLC細(xì)胞株的表達(dá)。
　　3.利用RNA干擾技術(shù)沉默VE-ca