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文檔簡介
1、食管癌是我國發(fā)病率和死亡率較高的消化道腫瘤,其中較為常見的組織學(xué)類型為食管鱗癌,大約占到食管癌的90%以上。食管癌的發(fā)生和發(fā)展涉及多個基因的調(diào)控和改變,研究這些基因在食管癌中的功能有助于闡明食管癌的發(fā)病機理,為基因靶向治療提供新的思路和方法。
p16基因位于人類第9號染色體上,是一個重要的細胞周期調(diào)控因子。該基因的表達產(chǎn)物能夠與細胞周期蛋白D(Cyclin D)競爭性的結(jié)合細胞周期蛋白依賴激酶(Cyclin Dependent
2、 Kinase,CDK)4或6,抑制CDK4的活性,促使視網(wǎng)膜細胞瘤蛋白Rb去磷酸化,阻滯細胞周期的正常運行,調(diào)控細胞周期G1期到S期的轉(zhuǎn)變。在許多腫瘤細胞中,p16基因存在高頻率的突變或缺失,表明該基因可能參與了多種腫瘤的發(fā)生過程,因此對該基因的深入研究能夠進一步弄清腫瘤的起因,為腫瘤的預(yù)防、診斷和治療提供理論依據(jù)。
抑癌基因的失活和/或原癌基因的激活是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的最基本的分子事件,因此可以嘗試通過增強抑癌基因的表達來提
3、高人體自身的腫瘤抑制能力。p16基因作為一個重要的抑癌基因,它能夠通過直接阻滯細胞周期而抑制細胞增殖,在基因治療腫瘤中潛力巨大。
目的:
對人類p16基因在食管鱗癌細胞EC9706中的功能進行探討,研究該基因?qū)C9706細胞增殖和凋亡的影響,分析其作為治療食管鱗癌靶向基因的可能性。
方法:
PCR擴增人類p16基因,構(gòu)建真核表達載體pcDNA3.1(+)-p16,通過細胞轉(zhuǎn)染將重組載體導(dǎo)入EC9
4、706細胞??股睾Y選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株,并利用半定量PCR和Western Blot對細胞株進行鑒定。通過細胞增殖實驗檢測p16基因高表達后對EC9706細胞增殖的影響,并利用Western Blot檢測凋亡起始蛋白Caspase9的表達變化。
結(jié)果:
與對照組相比,抗生素篩選得到的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株中 p16基因和蛋白的表達量顯著增高,表明pcDNA3.1(+)-p16在轉(zhuǎn)染后的細胞中穩(wěn)定持續(xù)的表達;穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株增
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