WISP2基因過表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的影響.pdf

1、目的：探討WISP2基因過表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及可能涉及的分子機(jī)制。
　　方法：分別構(gòu)建WISP2基因過表達(dá)質(zhì)粒和含空質(zhì)粒載體的陰性對(duì)照組，使用Lpofectamin2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染低分化食管癌細(xì)胞E109，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative real-time PCR,qPCR）和蛋白印記（Western blot, WB）技術(shù)在基因及蛋白水平檢測(cè)WISP2在E109-WISP2組（轉(zhuǎn)染組）、E109-

2、空質(zhì)粒組（轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組）和E109-空白組（未轉(zhuǎn)染W(wǎng)ISP2質(zhì)粒組）的表達(dá)；應(yīng)用CCK8檢測(cè)WISP2基因過表達(dá)前后細(xì)胞的增殖能力變化、Transwell小室和Matrigel基質(zhì)膠檢測(cè)WISP2基因過表達(dá)前后細(xì)胞侵襲、遷移能力的變化；qPCR、Western blot技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞ERK-1/2、Slug和E-cadherin的RNA和蛋白的表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染E109-WISP2組中WISP2基因mRNA表達(dá)

3、(66.07±12.34)與E109-空質(zhì)粒組(1.17±0.09)和 E109-空白組相比明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組WISP2基因表達(dá)無明顯差異（P>0.05）；E109-WISP2組中WISP2蛋白表達(dá)水平與E109-空質(zhì)粒組及E109-空白組相比明顯升高，和兩對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CCK8法檢測(cè)結(jié)果顯示E109-WISP2組(0.225±0.003)與

4、E109-空質(zhì)粒組(0.26±0.003)及E109-空白組(0.26±0.001)相比增殖能力明顯降低，和兩對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組無明顯差異（P>0.05）；Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)顯示W(wǎng)ISP2過表達(dá)后食管癌細(xì)胞穿透Matrigel基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)（26.60±4.81），顯著低于E109-空質(zhì)粒組（53.20±4.32）及E109-空白組(56.00±4.90)，差異

5、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組相比無明顯差異（P>0.05）。Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)顯示W(wǎng)ISP2過表達(dá)后癌細(xì)胞通過聚碳酸酯微孔濾膜的細(xì)胞數(shù)（55.20±4.52），顯著低于E109-空質(zhì)粒組（95.5±4.79）及E109-空白組(99.60±5.78)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組相比無明顯差異（P>0.05）。 qPCR及Western

6、blot檢測(cè)結(jié)果顯示E109-WISP2組細(xì)胞與E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組相比， ERK-1/2、Slug表達(dá)降低，而E-cadherin表達(dá)升高。
　　結(jié)論：WISP2基因的過表達(dá)能明顯降低食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移能力；WISP2基因過表達(dá)能降低ERK-1/2、Slug的表達(dá)及提高E-cadherin的表達(dá)；WISP2基因可能通過調(diào)節(jié)ERK1/2的表達(dá)抑制食管癌細(xì)胞的增殖能力；通過調(diào)節(jié)Slug和E-cadherin