存活素基因過(guò)表達(dá)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和增殖能力的影響.pdf

1、目的：外周動(dòng)脈疾病（Periphery artery disease,PAD）是血管外科常見(jiàn)病種，在該病初期因外周動(dòng)脈狹窄程度不重或及時(shí)形成側(cè)枝循環(huán)代償可無(wú)明顯臨床表現(xiàn)，或僅表現(xiàn)為下肢疲乏無(wú)力等較輕癥狀，但如果在疾病初期不加干預(yù)，隨著病程的快速進(jìn)展，外周動(dòng)脈可進(jìn)一步狹窄，進(jìn)而出現(xiàn)疼痛、間歇性跛行等下肢缺血癥狀，此時(shí)積極治療只能減緩疾病的進(jìn)一步發(fā)展，但不能從根本上治愈疾病。目前國(guó)內(nèi)外PAD的治療措施主要為藥物治療、動(dòng)脈旁路移植及介入治療等

2、，病程及治療過(guò)程中因各種因素影響均可不同程度損傷動(dòng)脈內(nèi)膜，而動(dòng)脈內(nèi)膜一旦損傷后因血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力極差，不能及時(shí)修復(fù)導(dǎo)致?lián)p傷處更易血栓形成，導(dǎo)致血管管腔的進(jìn)一步狹窄。目前國(guó)內(nèi)外把如何能高效修復(fù)內(nèi)皮細(xì)胞損傷、靶向增大狹窄血管管腔，緩解患者臨床癥狀作為基礎(chǔ)研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)前期大量基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)存活素（Survivin,SVV）基因在轉(zhuǎn)入相關(guān)細(xì)胞中后可表現(xiàn)出抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖等多個(gè)方面的能力，因此研究轉(zhuǎn)染 SVV基因到血管內(nèi)皮細(xì)胞

3、增殖（Vascular endothelial cells,VECs）中后其增殖和遷移能力的變化，可得到符合需求的VECs。
　　方法:普食飼養(yǎng)SD大鼠（4-6周齡，雌雄各半），截取若干段大鼠腹主動(dòng)脈,行原代細(xì)胞培養(yǎng)1周左右得到穩(wěn)定生長(zhǎng)的大鼠動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞株（Rat artery endothelial cell,RAEC）。通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)及CD31細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)明確細(xì)胞類型，將細(xì)胞分成3組，分別為空白對(duì)照組（bc）、陰性對(duì)照組

4、（nc）及實(shí)驗(yàn)組（svv）。bc組無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基，nc組采用空病毒載體轉(zhuǎn)染，svv組采用攜帶SVV基因的腺病毒轉(zhuǎn)染，3組細(xì)胞經(jīng)過(guò)對(duì)應(yīng)處理后繼續(xù)培養(yǎng)以獲得足夠后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞蛋白質(zhì)。Western-blotting法檢測(cè)3組細(xì)胞中SVV蛋白水平，CCK8法檢測(cè)VECs的增殖能力，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)VECs遷移的能力，Western-blotting法檢測(cè)極光激酶B（AuroraB）、磷酸化AuroraB和著絲粒內(nèi)蛋白（INCE