周期性拉伸對人口腔鱗癌KB細(xì)胞凋亡及凋亡基因表達(dá)的影響.pdf

1、生物體的生長分化、遺傳物質(zhì)的傳遞及基因突變等生物效應(yīng),都與細(xì)胞所處的力學(xué)環(huán)境息息相關(guān)。機(jī)械應(yīng)力作用于生物體,經(jīng)機(jī)械一生物信號轉(zhuǎn)換在生物體內(nèi)發(fā)揮著重要作用,它可參與組織器官結(jié)構(gòu)、功能的調(diào)節(jié),還能影響正常細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及代謝。在腫瘤學(xué)方面,機(jī)械應(yīng)力同樣影響著癌細(xì)胞的異常增殖、凋亡及轉(zhuǎn)移,但關(guān)于機(jī)械應(yīng)力對癌細(xì)胞生物效應(yīng)的誘導(dǎo)作用及機(jī)理研究尚有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)通過FX-4000柔性基底加載裝置,對人口腔鱗狀KB細(xì)胞進(jìn)行體外加載培養(yǎng),

2、卸載后用流式細(xì)胞儀檢測分析KB細(xì)胞的凋亡情況、運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測分析KB細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的情況、結(jié)合低劑量抗癌藥物順鉑對KB細(xì)胞凋亡的影響,探討機(jī)械應(yīng)力促進(jìn)人口腔鱗狀KB細(xì)胞凋亡的機(jī)理。
　　 主要工作如下:
　　 1、周期性拉伸對KB細(xì)胞凋亡的影響本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用FX-4000柔性基底加載系統(tǒng),以不同的加載程式(方波、24小時(shí)、頻率0.5Hz,拉伸幅度為10％及15%兩組),對人口腔鱗癌KB細(xì)胞進(jìn)行體外加載培養(yǎng),

3、同時(shí)設(shè)定靜態(tài)對照組。卸載后用流式細(xì)胞儀檢測分析KB細(xì)胞的凋亡情況、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測分析KB細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bc1-2、Bax和Caspase-3的表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)果:①流式細(xì)胞儀檢測凋亡率:10%、15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組的KB細(xì)胞平均凋亡率與靜態(tài)對照組比較均上升(P＜0.05);15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組平均凋亡率顯著高于10%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05)。②實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測:10%、15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組較靜態(tài)對照實(shí)驗(yàn)組的

4、Bc1-2mRNA相對表達(dá)量均有降低;15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組與10%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組比較,15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組的Bc1-2 mRNA相對表達(dá)量下降顯著(P＜0.05);10%、15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組較靜態(tài)對照實(shí)驗(yàn)組的BaxmRNA和Caspase-3 mRNA相對表達(dá)量成上升趨勢(P＜0.05);15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組Bax mRNA和Caspase-3 mRNA相對表達(dá)量與10%周期性拉伸比較,15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組的Bax mRN

5、A和Caspase-3 mRNA相對表達(dá)量增長顯著(P＜0.05)。
　　 2、順鉑對KB細(xì)胞凋亡的影響實(shí)驗(yàn)選用低劑量順鉑對KB細(xì)胞進(jìn)行藥物干預(yù),實(shí)驗(yàn)結(jié)果:①12小時(shí)、1μg/ml順鉑實(shí)驗(yàn)組KB細(xì)胞平均凋亡率較對照組沒有明顯改變(P＞0.05);24小時(shí)、1μg/ml順鉑實(shí)驗(yàn)組KB細(xì)胞平均凋亡率增加(P＜0.05);②12小時(shí)、4μg/ml順鉑實(shí)驗(yàn)組KB細(xì)胞平均凋亡率較對照組有明顯提高(P＜0.05);24小時(shí)、4μg/ml順鉑

6、實(shí)驗(yàn)組KB細(xì)胞平均凋亡率顯著增長(P＜0.05);
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:
　　 1、周期性拉伸促進(jìn)了人口腔鱗癌KB細(xì)胞的凋亡,且15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組的凋亡率大于10%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的凋亡率;
　　 2、周期性拉伸不同程式均誘導(dǎo)凋亡因子Bc1-2、Bax和Caspase-3的表達(dá)顯著改變,15%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組對凋亡因子bc1-2、Bax和Caspase-3表達(dá)的影響作用顯著高于10%周期性拉伸實(shí)驗(yàn)組(P＜