鉛鎘對小鼠卵泡顆粒細胞凋亡及凋亡基因表達的影響.pdf

1、鎘(Cd)、鉛(Pb)是常見的環(huán)境污染物。它們除了具有神經、造血、消化、腎臟、肝臟及心血管等系統(tǒng)毒性外,還具有生殖毒性。本實驗主要通過研究這兩種重金屬對顆粒細胞凋亡的影響來探討其對小鼠生殖機能的毒性作用;而細胞凋亡的發(fā)生又與凋亡相關基因的基因組群有關,這些基因根據(jù)功能可分為凋亡基因和凋亡抑制基因,前者誘導細胞凋亡,主要有Bax、Bad、Bim、Bik、p53、Bcl-Xs等;后者抑制細胞凋亡,主要有Bcl-2、Bcl-X、Mcl-1等,

2、其中Bcl-2和Bax是細胞凋亡過程中起關鍵性作用的一對功能基因。本實驗主要討論凋亡發(fā)生過程中這兩個基因的相對表達量,從分子水平反應重金屬對凋亡的影響。
　　 本研究以25日齡小鼠為研究對象,分別用0.5 mg/kg、1 mg/kg、2mg/kg、4mg/kg醋酸鉛溶液連續(xù)攻毒5d,氯化鎘溶液攻毒48h,對照組小鼠注射超純水。醋酸鉛溶液攻毒5d、氯化鎘溶液攻毒48h后,各組小鼠注射PMSG,48h后脫頸椎法處死小鼠,取出卵巢,用

3、5號針頭刺破卵泡,收集顆粒細胞,用流式細胞儀檢測顆粒細胞凋亡率。結果顯示:連續(xù)攻毒醋酸鉛一周的小鼠,2mg/kg組顆粒細胞凋亡率最高。對照組、0.5mg/kg組與其有極顯著差異(P＜0.01),1mg/kg組、4mg/kg組與其有顯著差異(P＜0.05),其余各組均無顯著性差異(P＞0.05)。而一次性攻毒氯化鎘48h的小鼠,各組之間均無差異顯著性。
　　 根據(jù)NCBI上已發(fā)表的小鼠Bcl-2和Bax mRNA序列,在跨外顯子序

4、列處設計引物。采集小鼠卵巢組織,利用Trizol法提取總RNA,然后用RT-PCR法進行cDNA擴增,通過半定量RT-PCR檢測Bcl-2和Bax在小鼠卵巢中的表達情況。結果發(fā)現(xiàn),在2mg/kg濃度范圍內,隨著攻毒劑量的增加,Bcl-2表達量依次減弱,且極顯著低于對照組(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值在該濃度范圍內也逐漸下降,但當醋酸鉛濃度升高,為4mg/kg時,Bcl-2及Bcl-2/Bax值則有所升高,但均低于對照組;0.5