MiRNA-130a在小鼠卵泡發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)和對(duì)顆粒細(xì)胞的影響.pdf

1、MicroRNA是一種細(xì)胞內(nèi)源性的非編碼RNA分子，長(zhǎng)度約22-24個(gè)nt。它對(duì)基因表達(dá)主要起到負(fù)調(diào)控作用，可以抑制特定基因的翻譯或介導(dǎo)其mRNA的降解，從而參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡等過(guò)程的調(diào)控。
　　隨著microRNA研究的不斷深入，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)利用基因敲除或條件性基因敲除小鼠模型，發(fā)現(xiàn)microRNA及其信號(hào)途徑在卵泡發(fā)育過(guò)程中也具有重要的調(diào)節(jié)作用。MicroRNA在小鼠卵巢中直接或間接調(diào)節(jié)靶基因或卵泡發(fā)育基因mRNA的表達(dá)，

2、從而參與小鼠卵泡發(fā)育過(guò)程。
　　本實(shí)驗(yàn)以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)real time PCR檢測(cè)mir-130a在小鼠不同發(fā)育階段中卵泡和卵泡顆粒細(xì)胞中的表達(dá)水平，來(lái)揭示mir-130a在小鼠卵泡中的表達(dá)規(guī)律及推測(cè)其可能起到的作用。然后利用小鼠卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)模型，用mir-130a的模擬物轉(zhuǎn)染顆粒細(xì)胞，進(jìn)一步研究了mir-130a對(duì)顆粒細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的影響。
　　研究?jī)?nèi)容及實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.mir-130a在

3、小鼠卵泡不同發(fā)育階段中的表達(dá)具有差異性。分別取新生小鼠出生后12d，21d，21dPMSG48h，21dPMSG48hhCG6h的卵泡提取RNA，通過(guò)Q-PCR檢測(cè)mir-130a的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)mir-130a在小腔前卵泡(100～130μm)中的表達(dá)水平最高，此后在大腔前卵泡(200～280μm)、有腔卵泡(450～550μm)、成熟卵泡（500～600μm）中的表達(dá)水平一直顯著下調(diào)(P＜0.05)。
　　2.mir-130a

4、在小鼠不同發(fā)育階段的卵泡顆粒細(xì)胞中差異性表達(dá)。通過(guò)realtimePCR結(jié)果表明:與小腔前卵泡（100～130μm）顆粒細(xì)胞的表達(dá)水平相比，mir-130a在大腔前卵泡（200～280μm）顆粒細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著下調(diào)(P＜0.05)，此后在有腔卵泡（450～550μm）顆粒細(xì)胞中的表達(dá)水平也是顯著下調(diào)(P＜0.05)，而在成熟卵泡（500～600μm）顆粒細(xì)胞中的表達(dá)水平卻顯著上調(diào)(P＜0.05)。我們發(fā)現(xiàn)mir-130a在不同發(fā)育階

5、段的卵泡顆粒細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律與其在不同發(fā)育階段的卵泡中的表達(dá)規(guī)律是不一致的。
　　3.mir-130a對(duì)顆粒細(xì)胞的增殖沒(méi)有影響。從新生小鼠21天后注射PMSG48h,hCG6h的卵巢中獲取成熟卵泡顆粒細(xì)胞，經(jīng)過(guò)體外顆粒細(xì)胞培養(yǎng)和傳代后，用mir-130a的模擬物轉(zhuǎn)染顆粒細(xì)胞，利用酶標(biāo)儀檢測(cè)顆粒細(xì)胞的增殖水平。結(jié)果顯示:mir-130a的模擬物對(duì)顆粒細(xì)胞的增殖水平?jīng)]有顯著的影響作用。這一結(jié)果暗示mir-130a可能不參與顆粒細(xì)胞的增