FHL2在小鼠卵巢中的表達和定位及對卵泡顆粒細胞的調(diào)控作用研究.pdf

1、FHL2(four and a half LIM domains protein2)屬于LIM-Only蛋白家族中的一員，可以與不同的蛋白因子互作，作為轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)子參與調(diào)控基因表達、細胞的增殖分化、細胞遷移和凋亡等諸多生理調(diào)節(jié)過程。FHL2在卵巢組織中表達，誘導性腺向卵巢分化，并參與調(diào)控抑制素基因的表達。但FHL2在小鼠卵巢中的表達定位模式，及對卵泡顆粒細胞的增殖、凋亡及類固醇激素分泌調(diào)控作用尚不清楚。
　　為了闡明FHL2在卵巢

2、中的表達定位規(guī)律及對卵泡顆粒細胞的調(diào)控作用，本研究從基因表達、組織表達、亞細胞定位、功能研究等幾方面研究了FHL2對小鼠卵泡顆粒細胞的調(diào)控作用。結(jié)果如下:
　　1、FHL2在小鼠卵巢中的表達與定位(1)在不同日齡(7d、14d、21d、28d)的小鼠卵巢中，應(yīng)用RT-PCR的方法證明了FHL2在小鼠卵巢中表達，且在不同日齡小鼠卵巢中表達量沒有差異;
　　(2)免疫組化結(jié)果表明，F(xiàn)HL2在小鼠卵巢中主要定位于卵泡顆粒細胞和基質(zhì)

3、細胞中，在各個時期卵泡中表達量差異不大。
　　(3)細胞免疫熒光結(jié)果表明，F(xiàn)HL2在小鼠卵泡顆粒細胞亞細胞定位于細胞核。
　　2、FHL2干擾對卵泡顆粒細胞生長和凋亡及分泌功能的影響(1)卵泡顆粒細胞轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒72h后，應(yīng)用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組中正常細胞比例顯著高于對照組（91.52±0.78 vs85.78±0.14，P＜0.05），細胞晚期凋亡率也顯著低于對照組（4.18±0.16 vs10.18±1

4、.81，P＜0.05），凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2顯著上調(diào)，Bax和Caspase-3表達水甲顯著下調(diào)，說明干擾后顆粒細胞的存活能力提高。
　　(2)利用流式細胞術(shù)分析細胞周期，發(fā)現(xiàn)FHL2干擾組處于S期顆粒細胞比例顯著多于對照組(36.83±0.40 vs24.02±0.33，P＜0.05)，處于G1期的細胞比例顯著低于對照組（48.31±1.02 vs62.96±0.72，P＜0.05），周期相關(guān)蛋白Cyclin E和Cyclin

5、B表達水平顯著提高，P21表達水平顯著下調(diào)，干擾后影響了顆粒細胞的有絲分裂過程;
　　(3)應(yīng)用MTT檢測轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒后的小鼠卵巢顆粒細胞增殖情況，結(jié)果表明，相對于對照組，F(xiàn)HL2干擾組細胞活力顯著增加(53.60％ vs15.43％，48h，P＜0.05;109.86％ vs33.33％，72h，P＜0.05)，干擾后顯著促進了顆粒細胞的增殖;
　　(4)應(yīng)用ELISA方法檢測轉(zhuǎn)染后顆粒細胞類固醇分泌水平，結(jié)果表明，相對于

6、對照組，F(xiàn)HL2干擾組雌二醇（8.19±0.19 vs2.53±0.41，ng/L，P＜0.01）和孕酮水平（13.96±1.07 vs1.64±0.08，ng/mL，P＜0.01）顯著升高。
　　本課題研究了FHL2在小鼠卵巢組織及卵泡顆粒細胞亞細胞中的表達定位，發(fā)現(xiàn)FHL2在不同日齡的小鼠卵巢中表達量沒有差異，且主要定位于卵泡顆粒細胞的細胞核中，在不同發(fā)育階段卵泡中表達量差異不大。進一步研究FHL2對顆粒細胞調(diào)控作用，結(jié)果表明