熱應(yīng)激對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞功能及相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、本文研究了熱應(yīng)激對小鼠卵巢氧化指標(biāo)的影響，并體外培養(yǎng)了小鼠卵巢顆粒細(xì)胞，研究了不同溫度的熱處理對體外培養(yǎng)的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因表達(dá)量、類固醇激素分泌以及分泌相關(guān)基因表達(dá)量的影響，并通過檢測cAMP含量和FSHR mRNA表達(dá)量的變化，探討FSHR/cAMP/PKA通路是否是熱應(yīng)激的作用通路之一。旨在揭示熱對卵巢的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究熱應(yīng)激對雌性動物繁殖性能的影響提供一定的參考依據(jù)。
　　1.熱應(yīng)激對小鼠卵巢氧化能力

2、的影響
　　本試驗(yàn)的目的是研究熱應(yīng)激對小鼠卵巢組織氧化能力的影響。熱處理:選取36只小鼠隨機(jī)分成兩組，熱處理組置于溫度42℃、濕度60％的人工氣候箱，監(jiān)測直腸溫度，待直腸溫度升至40℃時維持30min后取出放回在之前環(huán)境中，6h后取樣。首先測定卵巢組織總氧化能力(T-AOC)，谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)活性及反應(yīng)脂質(zhì)過氧化水平的丙二醛(MDA)含量。T-AOC和GSH-Px的含量在熱應(yīng)激后顯著下降(P＜0.05)、而MDA含

3、量在熱應(yīng)激后顯著升高(P＜0.05)。以上研究結(jié)果表明，熱應(yīng)激會引起雌性小鼠的卵巢氧化損傷。
　　2.熱處理對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響
　　卵巢顆粒細(xì)胞是卵巢中的一種關(guān)鍵細(xì)胞，若卵巢顆粒細(xì)胞發(fā)生損傷則卵巢的功能會受到嚴(yán)重影響。本試驗(yàn)研究熱處理（40℃熱處理和43℃熱處理）后體外培養(yǎng)的原代小鼠卵巢顆粒細(xì)胞細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因（caspase-3、Bax、Bcl-2）表達(dá)的影響。結(jié)果表明，熱處理可誘導(dǎo)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡

4、、caspase-3的高表達(dá)以及Bax基因和Bcl-2基因表達(dá)量的不同變化。提示熱處理會引起卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡，這可能是熱引起卵巢損傷的一個重要原因，并且提示Bax可能有重要影響，而Bcl-2的作用不明顯。
　　3.熱處理對體外培養(yǎng)的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞主要類固醇激素的分泌及分泌相關(guān)基因表達(dá)量的影響
　　卵巢顆粒細(xì)胞分泌的類固醇激素主要包括雌激素和孕激素兩種激素，在調(diào)節(jié)卵巢生長發(fā)育和卵巢顆粒細(xì)胞自身的增殖分化中起主要生理作用的是

5、雌二醇(E2)和孕酮(P4)。雌二醇(E2)和孕酮(P4)能夠調(diào)控卵巢顆粒細(xì)胞自身凋亡，并且在調(diào)控卵泡發(fā)育和閉鎖中具有十分重要的地位，因此雌二醇(E2)和孕酮(P4)分泌水平發(fā)生變化會對卵巢的功能產(chǎn)生影響。本試驗(yàn)研究40℃熱處理和43℃熱處理后體外培養(yǎng)的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞雌二醇(E2)和孕酮(P4)的分泌及分泌相關(guān)基因(Star, CYP11A1，CYP19A1)表達(dá)量的變化。結(jié)果表明熱處理使小鼠卵巢顆粒細(xì)胞雌二醇(E2)和孕酮(P4)的

6、分泌量降低，43℃熱處理后雌二醇(E2)分泌下降顯著而40℃熱處理后雌二醇(E2)分泌下降不顯著，40℃熱處理和43℃熱處理后孕酮(P4)的分泌均下降顯著。顯示熱處理會影響小鼠卵巢顆粒細(xì)胞雌二醇(E2)和孕酮(P4)的分泌，使小鼠卵巢顆粒細(xì)胞分泌功能受到損傷，并且這兩種主要類固醇激素中的孕酮(P4)可能對熱更為敏感。43℃熱處理時，分泌相關(guān)基因(Star, CYP11A1，CYP19A1)表達(dá)量也顯著下降。提示熱處理會引起卵巢顆粒細(xì)胞的

7、雌二醇(E2)和孕酮(P4)分泌降低，且孕酮(P4)的分泌對熱更敏感，相關(guān)基因（Star, CYP11A1，CYP19A1）表達(dá)量下降，這可能也是熱引起卵巢損傷原因之一。
　　4.熱處理對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞FSHR/cAMP/PKA通路的影響
　　FSH在雌性動物中功能為刺激卵巢發(fā)育，卵泡發(fā)育和排卵。其發(fā)揮作用必須由FSHR來介導(dǎo)，而卵巢顆粒細(xì)胞是卵巢內(nèi)唯一一類表達(dá)FSHR的細(xì)胞，因此FSH能夠結(jié)合卵巢顆粒細(xì)胞中的FSHR發(fā)揮

8、生理作用。cAMP-PKA通路是細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的一個經(jīng)典途徑，卵巢顆粒細(xì)胞中的FSH/cAMP/PKA通路能夠優(yōu)化FSH調(diào)控的發(fā)揮，是需要重視的一條作用通路。我們推測熱處理會對FSH/cAMP/PKA通路造成影響，誘導(dǎo)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡和分泌功能損傷。結(jié)果顯示，43℃熱處理后，小鼠卵巢顆粒細(xì)胞分泌的cAMP顯著下降（P＜0.05）并且FSHR mRNA表達(dá)量顯著下降（P＜0.05），說明FSHR/cAMP/PKA可能是熱誘導(dǎo)小