sRAGE對(duì)PCOS卵巢顆粒細(xì)胞VEGF的調(diào)控作用研究.pdf

1、多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是常見的一種生殖內(nèi)分泌疾病，影響著約6％的生育期婦女，它可導(dǎo)致排卵障礙、生育力下降、胰島素抵抗(insulin resistance，IR)和高雄激素血癥等一系列癥狀，至今發(fā)病機(jī)制尚不清楚。有研究認(rèn)為 PCOS可能存在血管生成調(diào)節(jié)機(jī)制的失調(diào)，彩色多普勒超聲顯像發(fā)現(xiàn) PCOS婦女的卵巢基質(zhì)血流增加。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial gr

2、owth factor，VEGF)是一種強(qiáng)效的血管生成因子，其在卵巢黃素化顆粒細(xì)胞、卵巢基質(zhì)細(xì)胞及子宮內(nèi)膜細(xì)胞中均有表達(dá)，可調(diào)節(jié)女性生殖系統(tǒng)血管的周期性生成和血管通透性，且PCOS患者卵泡液及卵巢組織中VEGF的表達(dá)均升高，推測(cè)VEGF通過(guò)影響血管生成參與了PCOS的病理生理過(guò)程。
　　可溶性晚期糖基化終產(chǎn)物受體(soluble receptor for advanced glycation end-products，sRAGE)

3、是晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)的內(nèi)源分泌型。sRAGE與RAGE競(jìng)爭(zhēng)性地與配體AGEs結(jié)合，阻斷RAGE激活的下游細(xì)胞信號(hào)通路，因此被稱為“誘餌受體”。近年來(lái)研究表明sRAGE與慢性炎癥反應(yīng)、胰島素抵抗和卵巢儲(chǔ)備功能密切相關(guān)，提示sRAGE可能參與了PCOS的發(fā)生。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)：PCOS患者血液和卵泡液中sRAGE濃度均低于非PCOS患者，且PCOS患者卵泡液sRAGE水平與VEGF水平呈負(fù)相關(guān)。因此，我們推測(cè)sRAGE可能

4、通過(guò)降低VEGF表達(dá)而影響PCOS的發(fā)生發(fā)展，但具體的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。
　　雙調(diào)蛋白(amphiregulin，AREG)、β細(xì)胞素(betacellulin，BTC)和表皮調(diào)節(jié)素(epiregulin，EREG)是表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)家族的三個(gè)成員，因其結(jié)構(gòu)功能與EGF相似被稱為EGF相關(guān)生長(zhǎng)因子。EGF家族及其受體家族(ErbB家族)在女性生殖活動(dòng)中具有重要作用，通過(guò)旁分泌

5、和（或）自分泌的作用參與卵巢生殖活動(dòng)。研究證實(shí)這些因子在多種細(xì)胞中可以促進(jìn)VEGF表達(dá)。那么在PCOS卵巢顆粒細(xì)胞中sRAGE能否降低EGF相關(guān)生長(zhǎng)因子的表達(dá)，從而通過(guò)阻斷EGF相關(guān)生長(zhǎng)因子通路降低VEGF合成，本實(shí)驗(yàn)將就這一問(wèn)題進(jìn)行初步研究。
　　目的：
　　1.測(cè)定不同濃度的sRAGE在PCOS卵巢顆粒細(xì)胞中對(duì)VEGF表達(dá)的調(diào)控作用。
　　2.探討sRAGE在PCOS卵巢顆粒細(xì)胞中是否能通過(guò)阻斷EGF相關(guān)生長(zhǎng)因子通

6、路參與對(duì)VEGF表達(dá)的調(diào)控作用。
　　材料與方法：
　　選取10例于2015年03月-2015年06月期間在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心進(jìn)行體外受精(in vitro fertilization，IVF)助孕治療的PCOS患者的顆粒細(xì)胞為研究對(duì)象。收集患者經(jīng)陰道超聲取卵時(shí)獲得的所有卵泡液，提取卵巢顆粒細(xì)胞行體外培養(yǎng)，培養(yǎng)48h后將每例顆粒細(xì)胞分為四組，分別加入含有不同濃度的sRAGE(0μg/ml，0.6μg/ml，0.

7、9μg/ml，1.2μg/ml)的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)顆粒細(xì)胞24h。PCOS卵巢顆粒細(xì)胞經(jīng)sRAGE干預(yù)培養(yǎng)后分為兩份，其中一份采用Trizol法提取總 RNA，然后經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)測(cè)定VEGF和EGF相關(guān)因子（AREG、BTC及EREG）mRNA的表達(dá)；另一份采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè) VEGF蛋白的表達(dá)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)液中EGF相關(guān)因子：AREG、B

8、TC和EREG蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.0μg/ml，0.6μg/ml，0.9μg/ml，1.2μg/ml sRAGE濃度組，VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.349±0.347，0.817±0.163，0.472±0.101，0.321±0.106，VEGF mRNA表達(dá)水平隨sRAGE濃度增加而降低，四組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.0μg/ml，0.6μg/ml，0.9μg/ml，

9、1.2μg/ml sRAGE濃度組，VEGF蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為0.49±0.037，0.335±0.018，0.120±0.012，0.102±0.005，VEGF蛋白表達(dá)水平隨 sRAGE濃度增加而降低，四組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3. PCOS卵巢顆粒細(xì)胞經(jīng)sRAGE干預(yù)后，AREG、BTC和EREG mRNA的表達(dá)水平均降低，且三者的mRNA表達(dá)水平均隨 sRAGE濃度的增高而降低，四個(gè)濃度組之間的差

10、異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4. PCOS卵巢顆粒細(xì)胞經(jīng)sRAGE干預(yù)后，AREG、BTC和EREG蛋白的表達(dá)水平均降低，且三者的蛋白表達(dá)水平均隨sRAGE濃度的增高而降低，四個(gè)濃度組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. sRAGE在PCOS卵巢顆粒細(xì)胞中可降低VEGF mRNA的表達(dá)和蛋白的合成，且呈劑量依賴性。
　　2.在PCOS卵巢顆粒細(xì)胞中，sRAGE可通過(guò)阻斷 E