BMAL1對(duì)人卵巢顆粒細(xì)胞中雌激素合成的影響及其與PCOS相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是育齡期女性常見(jiàn)的內(nèi)分泌和代謝紊亂性疾病之一，其內(nèi)分泌及代謝系統(tǒng)的異常往往表現(xiàn)為損害女性生殖健康甚至造成不孕。此類患者其卵巢中卵泡刺激素（Follicle Stimulating Hormone，F(xiàn)SH）的作用受到阻滯，最終導(dǎo)致卵泡異常閉鎖，不排卵。BMAL1（Brain and muscle ARNT-like protein1）被認(rèn)為在哺乳動(dòng)物生

2、殖系統(tǒng)卵巢的卵泡發(fā)育和激素合成中起到重要作用，對(duì)于維持哺乳動(dòng)物生殖功能有著重要的功能。SIRT1（Sirtuin1）在維持哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育過(guò)程正常進(jìn)行中起到重要作用，并通過(guò)與 BMAL1相互作用而呈現(xiàn)節(jié)律性表現(xiàn)。研究顯示，其在顆粒細(xì)胞等雌激素合成細(xì)胞中對(duì)芳香化酶的表達(dá)調(diào)控起到重要作用。然而，BMAL1在PCOS患者卵巢顆粒細(xì)胞中表達(dá)與正常人群是否存在差異，人的顆粒細(xì)胞中BMAL1是否參與同時(shí)如何調(diào)控雌激素合成，SIRT1在此過(guò)程中扮演著

3、什么樣的角色仍是不明確的。我們的實(shí)驗(yàn)旨在研究 BMAL1是否與 PCOS的發(fā)生發(fā)展存在聯(lián)系，BMAL1是否并且如何在人顆粒細(xì)胞中對(duì)雌激素合成起到調(diào)控作用。
　　方法：⑴納入了2014年9月-2015年9月在仁濟(jì)醫(yī)院生殖中心 IVF/ICSI-ET予長(zhǎng)方案促排卵，以 hCG為扳機(jī)方式的PCOS患者及非 PCOS患者各24例，檢測(cè)記錄了包括年齡、BMI、空腹血糖、hCG用量等臨床指標(biāo)，收集其卵巢卵泡液樣本并進(jìn)行顆粒細(xì)胞提取，通過(guò) qR

4、T-PCR檢測(cè)兩組人群顆粒細(xì)胞中BMAL1 mRNA的水平。⑵利用人原代顆粒細(xì)胞及人卵巢顆粒細(xì)胞系KGN作為細(xì)胞模型，采用干擾RNA、過(guò)表達(dá)、添加抑制劑等實(shí)驗(yàn)，通過(guò)免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)細(xì)胞上清液雌激素合成，qRT-PCR以及Western Blot等實(shí)驗(yàn)方法來(lái)對(duì)人卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)BMAL1對(duì)芳香化酶表達(dá)及雌激素合成調(diào)節(jié)的具體機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)分析。
　　結(jié)果：①qRT-PCR結(jié)果顯示，PCOS患者的卵巢顆粒細(xì)胞中 BMAL1的mRNA

5、表達(dá)水平顯著低于非PCOS患者（p<0.05）。②在KGN細(xì)胞中敲低BMAL1后細(xì)胞雌激素合成減少，同時(shí)其芳香化酶、SIRT1表達(dá)水平降低，過(guò)表達(dá) BMAL1后，細(xì)胞雌激素合成水平升高，芳香化酶及 SIRT1表達(dá)水平升高。在 KGN細(xì)胞中敲低 SIRT1后細(xì)胞雌激素合成減少，同時(shí)芳香化酶、BMAL1表達(dá)水平降低，過(guò)表達(dá) SIRT1后，細(xì)胞雌激素合成水平升高，芳香化酶及BMAL1表達(dá)水平升高。BMAL1和SIRT1敲低后細(xì)胞 JNK磷酸化

6、水平降低，JNK過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞雌激素合成水平升高，芳香化酶，BMAL1及 SIRT1表達(dá)水平均表現(xiàn)為升高。應(yīng)用 JNK或 SIRT1抑制劑作用KGN細(xì)胞后，細(xì)胞雌激素合成降低，BMAL1、SIRT1和JNK表達(dá)水平下調(diào)；抑制劑作用于原代顆粒細(xì)胞后同樣表現(xiàn)為細(xì)胞雌激素合成降低，BMAL1、SIRT1和JNK表達(dá)水平下調(diào)。
　　結(jié)論：闡述了BMAL1在人卵巢顆粒細(xì)胞中對(duì)雌激素合成的作用，發(fā)現(xiàn)了 BMAL1-SIRT1這一正反饋環(huán)路在