一氧化氮對豬卵泡顆粒細胞凋亡和卵母細胞成熟的影響.pdf

1、一氧化氮 (nitric oxide，NO) 是一種氣體自由基，廣泛存在于各組織器官的各種細胞中，參與循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)等多種生理和病理過程。在雌性生殖系統(tǒng)中，NO參與卵泡的發(fā)育、卵母細胞的成熟、排卵、黃體退化、受精、胚胎著床、維持妊娠、調(diào)節(jié)分娩、月經(jīng)周期的調(diào)控等一系列生殖過程。NO對顆粒細胞作用的研究主要集中在鼠(包括人)上，在其他動物上報道不多。 本文以豬為對象，研究了NO對顆粒細胞凋亡和細胞周

2、期的影響，對卵母細胞成熟及發(fā)育能力的影響，以及與激素的相互調(diào)節(jié)的作用。用不同濃度的NO供體硝普鈉 (sodium nitroprusside，SNP)(0mM,0.01mM,0.1mM，1mM)處理貼壁的壁顆粒細胞和卵丘卵母細胞復合體(COCs)。培養(yǎng)結(jié)束后，觀察細胞的形態(tài)，檢測細胞的凋亡、細胞周期和培養(yǎng)液中的激素含量，檢查卵母細胞的成熟率并孤雌激活后觀察胚胎的發(fā)育情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0.01mM SNP對培養(yǎng)細胞的生長形態(tài)沒有影響，0.1

3、mM和1mM SNP能促使貼壁的細胞收縮，且形態(tài)不規(guī)則，促使培養(yǎng)后消化的細胞表面粗糙，細胞膜呈現(xiàn)出許多小泡狀突起。0.01mM SNP可降低2mm和4mm卵泡壁顆粒細胞的凋亡率，對卵丘細胞的凋亡沒有影響。0.1mM和1mM促進了2mm和4mm卵泡壁顆粒細胞和卵丘細胞凋亡。NO對不同細胞類型和壁顆粒細胞的不同發(fā)育階段凋亡的影響不一樣：卵丘細胞凋亡率低于2mm壁顆粒細胞(P<0.05)，2mm壁顆粒細胞凋亡率低于4mm壁顆粒細胞(P<0.0

4、5)。1mM。SNP對凋亡作用最明顯(P<0.05)，在2mm卵泡壁顆粒細胞達到55％，比對照組高出47個百分點，在4mm比對照組高出42個百分點，在卵丘細胞其凋亡率達到9％，比對照組降低8個百分點。SNP能劑量依賴性降低2mm，4mm卵泡壁顆粒細胞和卵丘細胞G0/G1期細胞，在2mm和4mm卵泡可分別由對照組的84％降到1mM的32％，對照組的76％降到1mM的31％，但0.01mM在4mm卵泡壁顆粒細胞和卵丘細胞與對照組相比，差異不

5、顯著。SNP可增加s期和G2/M期細胞的比率，以1mM作用最明顯(P<0.05)。0.1mM和1mM SNP能抑制2mm和4mm卵泡壁顆粒細胞雌二醇的分泌作用(P<0.05)。1mM SNP能抑制2mm和4mm卵泡壁顆粒細胞孕酮的分泌作用(P<0.05)。與對照組相比，0.01mM SNP提高了受冷刺激的卵母細胞的成熟率(P<0.05)，由15％提高到18％，但對后期孤雌胚的發(fā)育沒有影響。0.1mM和1mM組降低了卵母細胞的成熟率和孤雌

6、胚的卵裂率，這兩組的胚胎沒有發(fā)育到桑囊胚的。 研究結(jié)果表明：豬卵巢上卵泡內(nèi)顆粒細胞體外培養(yǎng)時，NO會影響顆粒細胞的形態(tài)、凋亡、細胞周期和類固醇激素的分泌，且作用隨著NO水平的變化表現(xiàn)出很大的差異。高濃度的NO使顆粒細胞的形態(tài)發(fā)生異常，低水平NO則不會；高水平的NO促進顆粒細胞的凋亡，低水平則有抑制作用；NO還能劑量依賴性地降低G0/G1期顆粒細胞的比例，增加s期和G2/M期的比率；高濃度的NO抑制顆粒細胞分泌雌二醇和孕酮；高濃度