卵泡直徑對豬卵母細胞胞質成熟的影響.pdf

1、獲取高質量的體外成熟卵母細胞是成功進行哺乳動物體外受精、胚胎生產和克隆的關鍵,在體內,卵母細胞的受精與發(fā)育能力是伴隨著卵泡由小到大的生長過程逐漸獲得的,由此推測卵泡直徑可能是卵母細胞體外成熟質量的關鍵性影響因素。因此本文以豬卵巢為研究對象,按直徑將卵巢表面卵泡分為兩組:4-7mm(G1,含有4mm)組和2-4mm(G2,不包含4mm)組,在體外成熟培養(yǎng)前后,以核成熟為輔助,著重以孤雌發(fā)育能力、卵丘擴展及相關基因表達、卵母細胞線粒體拷貝數

2、、谷胱甘肽含量等為主要依據研究了卵泡直徑對卵母細胞胞質成熟的影響。
　　 實驗結果如下:
　　 1)卵泡直徑對卵母細胞核成熟的影響:將不同直徑卵泡來源的卵母細胞分組抽取并培養(yǎng),42h后,以第一極體的排出作為核成熟的檢測標準,發(fā)現G1組核成熟率顯著高于G2組(95.06％vs68.19％,P＜0.05)。
　　 2)卵泡直徑對卵母細胞胞質成熟的影響
　　 (1)對來源于不同直徑卵泡的核成熟卵母細胞進行電脈沖

3、刺激,獲得孤雌胚胎,經體外培養(yǎng)后發(fā)現,G1組囊胚率顯著高于G2組(51.47％vs29.44％,P＜0.05),但組間囊胚細胞數差異不顯著。
　　 (2)利用RealtimePCR分別在體外成熟培養(yǎng)的0h、24h、42h對轉化生長因子家族基因Gaf9,Bmp15,Bmpr2和卵丘擴展標志基因Has2,Ptgs2,Ptx31及孕酮受體Pgr的表達進行了研究,結果發(fā)現,在卵母細胞體外成熟培養(yǎng)過程中,Gaf9,Bmp15,Bmpr2的

4、表達在組間差異不顯著。G1組的卵丘擴展相關基因Has2,Ptgs2,Ptx31及孕酮受體Pgr的表達水平顯著高于G2組(P＜0.05)。
　　 (3)利用絕對定量PCR,對卵母細胞線粒體拷貝數進行檢測發(fā)現G1組的卵母細胞線粒體含量顯著高于G2組(P＜0.05),但在體外成熟培養(yǎng)前后,兩組的卵母細胞線粒體拷貝數無顯著變化。
　　 (4)應用DTNB(5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoic acid,5,

5、5'-二巰基-2-硝基苯酸)酶循環(huán)法對體外成熟培養(yǎng)的Oh、24h、42h的兩組卵母細胞總谷胱甘肽(tGSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)和還原型谷胱甘肽(GSH)含量進行檢測后發(fā)現,同一組內的卵母細胞中tGSH、GSSG和GSH含量在成熟培養(yǎng)過程中顯著減少,不同直徑卵泡來源的卵母細胞間tGHS和GSH含量差異顯著,而GSSH含量兩組間差異不顯著。
　　 結果表明:卵泡直徑除對卵母細胞核成熟率有顯著影響外,在卵丘擴展、線粒體拷貝數