卵泡直徑對豬卵母細胞胞質(zhì)成熟的影響.pdf

1、獲取高質(zhì)量的體外成熟卵母細胞是成功進行哺乳動物體外受精、胚胎生產(chǎn)和克隆的關(guān)鍵,在體內(nèi),卵母細胞的受精與發(fā)育能力是伴隨著卵泡由小到大的生長過程逐漸獲得的,由此推測卵泡直徑可能是卵母細胞體外成熟質(zhì)量的關(guān)鍵性影響因素。因此本文以豬卵巢為研究對象,按直徑將卵巢表面卵泡分為兩組:4-7mm(G1,含有4mm)組和2-4mm(G2,不包含4mm)組,在體外成熟培養(yǎng)前后,以核成熟為輔助,著重以孤雌發(fā)育能力、卵丘擴展及相關(guān)基因表達、卵母細胞線粒體拷貝數(shù)

2、、谷胱甘肽含量等為主要依據(jù)研究了卵泡直徑對卵母細胞胞質(zhì)成熟的影響。
　　 實驗結(jié)果如下:
　　 1)卵泡直徑對卵母細胞核成熟的影響:將不同直徑卵泡來源的卵母細胞分組抽取并培養(yǎng),42h后,以第一極體的排出作為核成熟的檢測標準,發(fā)現(xiàn)G1組核成熟率顯著高于G2組(95.06％vs68.19％,P＜0.05)。
　　 2)卵泡直徑對卵母細胞胞質(zhì)成熟的影響
　　 (1)對來源于不同直徑卵泡的核成熟卵母細胞進行電脈沖

3、刺激,獲得孤雌胚胎,經(jīng)體外培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn),G1組囊胚率顯著高于G2組(51.47％vs29.44％,P＜0.05),但組間囊胚細胞數(shù)差異不顯著。
　　 (2)利用RealtimePCR分別在體外成熟培養(yǎng)的0h、24h、42h對轉(zhuǎn)化生長因子家族基因Gaf9,Bmp15,Bmpr2和卵丘擴展標志基因Has2,Ptgs2,Ptx31及孕酮受體Pgr的表達進行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在卵母細胞體外成熟培養(yǎng)過程中,Gaf9,Bmp15,Bmpr2的

4、表達在組間差異不顯著。G1組的卵丘擴展相關(guān)基因Has2,Ptgs2,Ptx31及孕酮受體Pgr的表達水平顯著高于G2組(P＜0.05)。
　　 (3)利用絕對定量PCR,對卵母細胞線粒體拷貝數(shù)進行檢測發(fā)現(xiàn)G1組的卵母細胞線粒體含量顯著高于G2組(P＜0.05),但在體外成熟培養(yǎng)前后,兩組的卵母細胞線粒體拷貝數(shù)無顯著變化。
　　 (4)應(yīng)用DTNB(5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoic acid,5,

5、5'-二巰基-2-硝基苯酸)酶循環(huán)法對體外成熟培養(yǎng)的Oh、24h、42h的兩組卵母細胞總谷胱甘肽(tGSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)和還原型谷胱甘肽(GSH)含量進行檢測后發(fā)現(xiàn),同一組內(nèi)的卵母細胞中tGSH、GSSG和GSH含量在成熟培養(yǎng)過程中顯著減少,不同直徑卵泡來源的卵母細胞間tGHS和GSH含量差異顯著,而GSSH含量兩組間差異不顯著。
　　 結(jié)果表明:卵泡直徑除對卵母細胞核成熟率有顯著影響外,在卵丘擴展、線粒體拷貝數(shù)