卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟及其發(fā)育能力的影響.pdf

1、隨著胚胎生物技術(shù)的發(fā)展，對(duì)體外成熟卵母細(xì)胞的質(zhì)量要求日益增加。卵母細(xì)胞體外成熟及其發(fā)育能力的研究已成為體外受精（IVF）、胚胎體外生產(chǎn)（IVP）和體細(xì)胞核移植（SCNT）等技術(shù)發(fā)展的關(guān)鍵之一。目前，通過體外培養(yǎng)而獲得的卵母細(xì)胞，其胞質(zhì)成熟程度仍不及體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞，深入了解卵母細(xì)胞的成熟規(guī)律，進(jìn)一步改善體外培養(yǎng)技術(shù)，不斷完善卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)系統(tǒng)依然是當(dāng)前胚胎生物技術(shù)領(lǐng)域的重要內(nèi)容之一。業(yè)已證明，卵丘細(xì)胞在卵母細(xì)胞成熟過程中扮演著重

2、要角色。研究卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞成熟及其發(fā)育能力的影響，具有重要的理論意義和實(shí)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)擬通過對(duì)豬裸卵單獨(dú)培養(yǎng)、裸卵與卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)及卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體（COC）與卵泡的培養(yǎng)與比較，側(cè)重研究卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞發(fā)育成熟的作用，卵丘細(xì)胞對(duì)體外受精（IVF）胚胎發(fā)育的影響。采用Real-time PCR測(cè)定各組豬卵母細(xì)胞Fas/FasL mRNA相對(duì)表達(dá)量，分析卵母細(xì)胞體外成熟、受精及其后的胚胎發(fā)育過程中Fas/FasL mRNA表達(dá)水

3、平的變化，為進(jìn)一步了解卵丘細(xì)胞影響豬卵母細(xì)胞體外成熟及發(fā)育能力的分子機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)參考。試驗(yàn)結(jié)果表明：
　　 （1）裸卵組、裸卵與卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)組及COC組卵母細(xì)胞，經(jīng)體外成熟培養(yǎng)48h后，透明帶外徑均顯著高于培養(yǎng)前對(duì)照組（分別為158±41、5.82、160.02±4.05、160.38±5.98對(duì)148.96±5.30；P<0.05），但3組間培養(yǎng)后的透明帶外徑差異不顯著（p>0.05）。
　　 （2）COC組豬卵母細(xì)

4、胞經(jīng)成熟培養(yǎng)后第一極體（pbⅠ）排出率最高（71.25％），顯著高于共培養(yǎng)組、裸卵組和卵泡組（分別為49.32％，31.46％和27.14％；P<0.05）；共培養(yǎng)組pbⅠ排出率顯著高于裸卵組和卵泡組，以卵泡組的pbⅠ排出率最低。COC組所獲A級(jí)卵母細(xì)胞的比例也顯著高于其他3組，共培養(yǎng)組則高于裸卵組和卵泡組。COC組C級(jí)卵母細(xì)胞比例最低（8.33％），卵泡組C級(jí)卵母細(xì)胞比例18.57％，共培養(yǎng)組為24.43％，裸卵組所獲C級(jí)卵母細(xì)胞比例

5、最高，達(dá)44.60％。COC組卵母細(xì)胞存活率為90.83％，顯著高于其他各組；裸卵組最低，為53.33％。結(jié)果顯示，卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞的成熟及質(zhì)量均具有顯著的影響。卵母細(xì)胞的成熟，可能受卵丘細(xì)胞的旁分泌作用與細(xì)胞間縫隙連接的雙重調(diào)控。
　　 （3）卵泡組的pbⅠ排出率雖然較低，但它的卵母細(xì)胞存活率顯著高于裸卵組，且卵泡組以B級(jí)卵母細(xì)胞居多，pbⅠ排出率低可能與卵母細(xì)胞的核成熟有關(guān)，卵泡整體培養(yǎng)有可能存在抑制卵母細(xì)胞核成熟的因素

6、，導(dǎo)致pbⅠ排出率降低，但大量B級(jí)卵母細(xì)胞的產(chǎn)生，至少可以說明卵泡結(jié)構(gòu)對(duì)于卵母細(xì)胞具有積極的保護(hù)作用。
　　 （4）COC組在2-細(xì)胞、4-細(xì)胞期和囊胚期的發(fā)育率與存活率，均顯著高于裸卵與卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)組或裸卵組。而裸卵與卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)，其各期胚胎發(fā)育率和存活率又高于裸卵單獨(dú)培養(yǎng)，不過此兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明卵丘細(xì)胞與卵母細(xì)胞間的縫隙連接，對(duì)豬卵母細(xì)胞的發(fā)育能力具有明顯的影響。
　　 （5）卵母細(xì)胞從GV期到MⅡ期，其

7、Fas/FasL mRNA表達(dá)量并無顯著增加，F(xiàn)as/FasL mRNA在此階段的表達(dá)一直處于較低水平。與GV期相比，COC組、裸卵與卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)組、裸卵組和卵泡組MⅡ期卵母細(xì)胞Fas/FasL mRNA表達(dá)量各組均有所升高，但各組間無顯著差異。在卵母細(xì)胞成熟階段，F(xiàn)aS/FasL凋亡信號(hào)通路也許并非主要的調(diào)控方式，這是否暗示該階段卵母細(xì)胞的凋亡調(diào)控還可能存在其他信號(hào)通路，尚需進(jìn)一步的研究。
　　 （6）胚胎早期各階段均有Fa

8、s/FaSL mRNA的表達(dá)，在胚胎2-細(xì)胞階段，裸卵組胚胎Fas/FasL mRNA表達(dá)量迅速提高，顯著高于裸卵與卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)組胚胎Fas/FasL mRNA表達(dá)量，裸卵與卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)組胚胎Fas/FasL mRNA表達(dá)量又顯著高于COC組胚胎Fas/FasL mRNA表達(dá)量。在胚胎4細(xì)胞階段，裸卵與卵丘細(xì)胞共培養(yǎng)組胚胎的Fas/FasL mRNA表達(dá)量要顯著高于COC組胚胎Fas/FasL mRNA表達(dá)量（P<0.05）。表明卵