AMH對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟及卵丘擴(kuò)展的調(diào)控作用研究.pdf

1、抗苗勒氏管激素(AMH)是轉(zhuǎn)化生長因子β超家族(TGF-β)成員之一，由雌性動(dòng)物的卵巢分泌，并通過2型受體(AMHR2)發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。AMH主要通過抑制原始卵泡的募集、降低有腔卵泡對(duì)FSH的敏感性而參與調(diào)控卵泡生長發(fā)育，AMH還可作為評(píng)估卵巢儲(chǔ)備能力、預(yù)測超排反應(yīng)的有效標(biāo)志物。然而，有關(guān)AMH基因功能的研究多集中于對(duì)類固醇激素的調(diào)控上，AMH對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟尤其是卵丘擴(kuò)展的研究報(bào)道較少。因此，本實(shí)驗(yàn)以昆明鼠的卵母細(xì)胞為研究對(duì)象，采

2、用體外培養(yǎng)、RT-PCR、Western Blot、ELISA等方法，分別研究AMH對(duì)裸卵和卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體體外成熟的影響，分析AMH對(duì)卵丘擴(kuò)展的調(diào)控作用，為提高卵母細(xì)胞的利用率奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)AMH及其受體在小鼠卵巢中的表達(dá)。通過檢測不同日齡小鼠卵巢中AMH及AMHR2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)AMH和AMHR2在14日齡時(shí)表達(dá)量最高;還發(fā)現(xiàn)AMH僅在卵丘顆粒細(xì)胞中表達(dá)，而AMHR2在卵丘顆粒細(xì)胞與卵母細(xì)胞中均有表達(dá)

3、，并且AMHR2的表達(dá)量隨著卵母細(xì)胞的發(fā)育呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，GV期卵母細(xì)胞中AMHR2的表達(dá)顯著高于MI期卵母細(xì)胞(P＜0.05)。
　　(2)AMH對(duì)體外培養(yǎng)裸卵成熟率的影響。在裸卵培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的rh-AMH(1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)，體外培養(yǎng)14h后，發(fā)現(xiàn)裸卵的成熟率與AMH濃度呈劑量依賴關(guān)系，其中100ng/mL添加組成熟率最高，且均顯著高于對(duì)照組和低劑量添加組(P＜0.05);隨著AM

4、H濃度的升高，MPF的含量逐漸增加，BMP15的表達(dá)量逐漸升高;此外，AMH添加組能極顯著降低胞質(zhì)中cAMP含量(P＜0.01)?？梢姡珹MH可能是通過上調(diào)BMP15表達(dá)、促進(jìn)MPF分泌與降低cAMP的途徑來促進(jìn)裸卵的體外成熟。
　　(3)AMH對(duì)卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COC)體外成熟的影響。將100ng/mL AMH與100ng/mL FSH單獨(dú)或聯(lián)合添加于卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COC)體外培養(yǎng)體系，分析AMH對(duì)COC體外成熟的影響

5、。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，添加100ng/mL AMH對(duì)COC的體外成熟無顯著性影響(P＞0.05);與FSH單獨(dú)添加組相比，AMH與FSH聯(lián)合添加組中COC的成熟率顯著降低(P＜0.05)，提示AMH能抑制FSH對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟的促進(jìn)作用;此外，還發(fā)現(xiàn)AMH能顯著抑制FSH促卵母細(xì)胞MPF分泌的作用。
　　(4)AMH對(duì)體外卵丘擴(kuò)展的調(diào)控作用。將100ng/mL AMH與100ng/mL FSH單獨(dú)或聯(lián)合添加于卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合

6、體(COC)體外培養(yǎng)體系，分析AMH對(duì)卵丘顆粒細(xì)胞擴(kuò)展的調(diào)控作用。結(jié)果顯示，AMH單獨(dú)處理組對(duì)卵丘擴(kuò)展沒有影響，而FSH添加組能顯著促進(jìn)卵丘顆粒細(xì)胞的擴(kuò)展(P＜0.05);與FSH單獨(dú)處理組相比，AMH與FSH聯(lián)合處理組能顯著降低卵丘擴(kuò)展指數(shù)(P＜0.05)，提示AMH能抑制FSH對(duì)卵丘擴(kuò)展的促進(jìn)作用。采用RT-PCR法檢測各處理中與卵丘擴(kuò)展相關(guān)基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)AMH能顯著上調(diào)卵丘顆粒細(xì)胞中Ptgs2mRNA的表達(dá)(P＜0.05)，而H