水牛卵母細胞體外成熟影響因素的研究.pdf

1、 該研究對水牛卵母細胞體外成熟的影響因素進行了探討.結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)在成熟培養(yǎng)系統(tǒng)中添加5×10<'6>/mL新鮮內(nèi)膜細胞或50％條件液(TCCM)時,水牛卵母細胞孤雌激活后的分裂率(48.0%,50.2%)和囊胚發(fā)育率(40.6%,50.4%)均有所提高,但差異不顯著(p>0.05).當(dāng)在成熟液中添加25%的TCCM時,卵母細胞孤雌激活后的分裂率(78.3%vs 55.0%)和囊胚發(fā)育率(53.4%vs 38.1%)均明顯提高(p<0.0

2、5).比較來自不同細胞培養(yǎng)階段TCCM成熟培養(yǎng)效果發(fā)現(xiàn),來自D3~D4的TCCM的卵母細胞孤雌激活囊胚發(fā)育率(62.9%)顯著高于來自D0~D2和D5~D6的TCCM(44.1%和49.3%,p<0.05).在IVM液中添加10%發(fā)情牛血清(ECS),卵母細胞第一極體排出率顯著高于添加5%和10%胎犢血清(FBS)(p<0.01)的卵母細胞,但卵母細胞激活后的分裂率(63.8%vs 68.0%和68.3%)和囊胚發(fā)育率(36.0%vs

3、49.4%和46.4%)無顯著差異(p>0.05).然而,添加10%FBS組的卵母細胞分裂率(68.3%)和囊胚發(fā)育率(46.4%)明顯高于添加10%發(fā)情水牛血清(EBS)組的卵母細胞(58.0%,33.1%;p<0.05),雖然其卵母細胞的極體排出率(62.7%)顯著低于10%EBS組(74.6%,p<0.05).在卵母細胞成熟培養(yǎng)液中添加10%的新鮮BFF,顯著提高卵母細胞孤雌激活后的囊胚發(fā)育率(39.6%vs 27.8%,p<0.

4、05),但卵母細胞的第一極體排出率則顯著低于未添加組(p<0.05).并且當(dāng)BFF的濃度從10%提高到20%時,第一極體排出率進一步降低.以上結(jié)果表明:(1)水牛新鮮卵泡內(nèi)膜細胞及其條件液有利于水牛卵母細胞的體外成熟;(2)卵泡內(nèi)膜細胞條件液的適宜收集時間是3~4d,適宜的添加比例是25%;(3)FBS(胎牛血清)主要促進水牛卵母細胞質(zhì)的成熟,而ECS(發(fā)情牛血清)則主要促進水牛卵母細胞核的成熟;(4)卵泡液對水牛卵母細胞質(zhì)的成熟具有促