鹿卵母細(xì)胞體外成熟與體外受精的研究.pdf

1、隨著胚胎生物工程技術(shù)的深入研究和不斷發(fā)展,在中國(guó)開(kāi)展對(duì)鹿胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)的研究顯得越來(lái)越重要與緊迫.該研究以中國(guó)的馬鹿為試驗(yàn)對(duì)象,對(duì)鹿胚胎體外生產(chǎn)體系中最關(guān)鍵的基礎(chǔ)性環(huán)節(jié)--鹿卵母細(xì)胞的體外成熟和體外受精進(jìn)行探索,旨在提出一套在實(shí)踐中具有可操作性的鹿卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,進(jìn)而為鹿體外受精研究奠定基礎(chǔ).試驗(yàn)研究結(jié)果表明:1、采用遞減法肌肉注射Folltropin-Ⅴ(Canada)并結(jié)合PG對(duì)馬鹿進(jìn)行超數(shù)排卵處理可以有效提高母鹿卵巢卵母細(xì)

2、胞的采集數(shù)量.2、采用先抽吸再切割的方法可以提高所獲取鹿COCs的數(shù)量.3、將所獲卵泡液和切割液經(jīng)過(guò)沖洗處理后再檢卵與直接檢卵相比:視野明了,蛋白質(zhì)等物質(zhì)不易發(fā)生凝集,卵的移取方便、快速.4、檢取的鹿卵母細(xì)胞可分為4級(jí):A級(jí)為卵丘細(xì)胞致密,不擴(kuò)散,細(xì)胞質(zhì)均勻,形狀規(guī)則,至少完全包裹有4層卵丘細(xì)胞;B級(jí)為卵丘細(xì)胞1~3層,基本上包裹卵母細(xì)胞;C級(jí)為半裸卵,卵母細(xì)胞外有部分卵丘細(xì)胞存在;D級(jí)為裸卵、變形卵,包括退化的卵母細(xì)胞.5、馬鹿的卵母

3、細(xì)胞在體外成熟培養(yǎng)中采用37℃和38.5℃兩種溫度條件的比較結(jié)果是:38.5℃條件下的卵母細(xì)胞成熟率(78.9﹪)顯著(p<0.05)高于37.0℃時(shí)的卵母細(xì)胞成熟率(44.4﹪).6、以M199作為馬鹿卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)的培養(yǎng)基,所配制的成熟液(1):M199+10﹪FBS+0.2mM丙酮酸鈉+1mM雙抗+10mM Hepes+10mg/ml GnRH+1mg/mlE<,2>與成熟液(2):M199+20﹪FBS+0.2MM丙酮酸鈉