水牛卵母細(xì)胞體外成熟及其調(diào)控的研究.pdf

1、1．探討了蛋白激酶C(PKC)在水牛卵母細(xì)胞成熟過程中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)添加PKC激活劑：PMA抑制水牛卵母細(xì)胞的成熟，而添加PKC抑制劑Calphostin C促進(jìn)水牛卵母細(xì)胞的成熟，且PMA對水牛卵母細(xì)胞成熟抑制作用不能被FSH解除。(2)PKC抑制劑Calphostin C能解除磷酸二酯酶抑制劑milrinone對水牛卵母細(xì)胞成熟的抑制作用。(3)第一次減數(shù)分裂的中晚期PKC活性的降低可能是卵母細(xì)胞退出MⅠ期進(jìn)入后期和MⅡ期

2、所必需的。 2．探討了水牛卵母細(xì)胞成熟過程中PKC基因的表達(dá)動態(tài)變化及其與卵母細(xì)胞成熟的關(guān)系。收集不同成熟培養(yǎng)時(shí)間(0，4，8，12，16，20和24h)的水牛卵母細(xì)胞，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測PKC基因的表達(dá)動態(tài)變化，同時(shí)檢查卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)在這7個時(shí)間點(diǎn)(0，4，8，12，16，20和24h)的核成熟狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，水牛卵母細(xì)胞成熟過程的前12h，伴隨著水牛卵母細(xì)胞GVBD的發(fā)生，PKC基因的表達(dá)水平逐步提高；而后1

3、2h，隨著PBI的排出，PKC基因的表達(dá)水平降低，表明PKC基因在水牛卵母細(xì)胞的成熟過程中可能具有重要作用。 3．探討了水牛卵母細(xì)胞成熟過程中PKC的激活對其隨后受精和胚胎發(fā)育的影響。水牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體在不同成熟培養(yǎng)液(即添加1mg/mLPVA，5％FCS，1.62×10-6mol/L PMA+1mg/mL PVA，1.62×10-6mol/L4a-PDD+1mg/mL PVA)中成熟24小時(shí)后通過SDS-PAGE電泳和W

4、estern blot檢測PKC的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PMA處理組沒有檢測到分子量大約為80kDa的PKC蛋白，而其余各組均檢測到PKC蛋白的存在，表明PKC激活劑PMA長時(shí)間處理水牛卵母細(xì)胞可能會導(dǎo)致PKC蛋白的耗竭而消失。同時(shí)對PMA和Calphostin C成熟培養(yǎng)的水牛卵母細(xì)胞體外受精后的原核形成率及其分裂率進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)在卵母細(xì)胞成熟過程中激活PKC有利于提高兩原核的形成率，但降低受精分裂率。(2)在水牛卵母細(xì)胞

5、成熟12小時(shí)后，在成熟液中添加較低濃度(小于10-7mol/L)PKC抑制劑Calphostin C對卵母細(xì)胞受精后的分裂率沒有影響，但當(dāng)濃度增大到1.26×106mol/L時(shí)，分裂率明顯降低。 4．探討了磷酸二酯酶抑制劑米力農(nóng)(milrinone)對水牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)Milrinone對水牛COCS的自發(fā)成熟具有抑制作用，且這種抑制作用能夠穩(wěn)定維持一定時(shí)間。(2)Milrinone能顯著抑制FSH誘導(dǎo)