熱應激誘發(fā)的豬卵丘細胞凋亡阻礙卵母細胞體外成熟.pdf

1、本試驗將探索熱應激條件下豬卵丘細胞對卵母細胞體外成熟的影響。卵丘細胞卵母細胞復合體(COCs)和裸卵(DOs)在體外成熟培養(yǎng)20h后，在42℃的條件下處理1h，然后一部分COCs脫去卵丘細胞，所有卵子在39℃繼續(xù)培養(yǎng)23h，試驗組共分3組：H1(DOs組，Oh脫去卵丘細胞)，H2(21h，即熱處理后COCs脫去卵丘細胞組)和H3組(COCs組，44h脫去卵丘細胞)，根據試驗組卵丘細胞處理方法，分別設相應對照組C1、C2和C3組，對照在3

2、9℃進行44h成熟培養(yǎng).44h成熟培養(yǎng)完成后分別對各組卵子進行形態(tài)學觀察，統(tǒng)計成熟率.結果發(fā)現(xiàn)H1和H2組的成熟率與對照沒有顯著差異，而H3組成熟率要明顯低于對照組(39.2±5.7％和78.2±8.2％)。經44h成熟培養(yǎng)、質量合格卵子經電激活后在體外發(fā)育培養(yǎng)，結果顯示熱處理組與對照組間的卵裂率、囊胚率和囊胚細胞數(shù)沒有顯著差異(P＞0.05)。但裸卵組(H1和C1組)囊胚率要明顯低于其它組(P＜0.05)，Comet檢測和TUNEL檢

3、測結果表明熱處理未對各組卵子DNA造成損傷，也未引起卵子凋亡。對卵丘細胞的Comet檢測結果表明熱處理后0h卵丘細胞的DNA發(fā)生明顯損傷，Comet檢測陽性率(63.5±13.7％)明顯高于對照組(8.9±2.5％)(P＜0.05)，再經23h成熟培養(yǎng)后熱處理組卵丘細胞Comet檢測陽性率顯著增加(74.8±7.4％)(P＜0.05)。對卵丘細胞的TUNEL檢測結果表明熱處理后0h卵丘細胞凋亡比例與對照組相比并未上升(4.2±1.0％和