豬卵母細胞體外成熟前后基因差異表達的初步研究.pdf

1、當今，卵母細胞體外成熟培養(yǎng)技術雖然取得了很大的進展，但是體外成熟卵母細胞的質量還是不如體內成熟的卵母細胞，其質量直接影響著體外受精、核移植、轉基因等現(xiàn)代胚胎生物工程的進展。在卵母細胞上成熟調控機制還處于研究階段，尤其是在分子層面上的成熟機制還不是很清楚。本研究運用mRNA差異顯示技術(differential display reverse transcription polymerase chain reaction，DDRT-PCR

2、)對豬的卵母細胞體外成熟前后差異表達的基因進行初步研究，以便更清晰地了解豬卵母細胞成熟的分子機制，為豬卵母細胞體外成熟制定更完善的培養(yǎng)體系。
　　 本研究以3條錨定引物和3條隨機引物，對豬卵母細胞成熟前后差異表達的基因進行PCR擴增，PCR產物經聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染后，從凝膠回收得到了20條差異表達條帶，其中14條在第二次PCR擴增反應中得到重擴增，12條重擴增后的條帶得到成功克隆，7條克隆成功的條帶測序成功。經BLAST軟

3、件在GenBank中比對，發(fā)現(xiàn)差異條帶11、12和SH3GLBl（SH3-domain GRB2-1ike endophilin Bl）基因具有較高的同源性，預測其功能是維持卵母細胞內線粒體的正常形態(tài)，抑制線粒體途徑的細胞凋亡；差異條帶15和LGALS3(lectin galactoside-bindingsoluble3)基因具有較高的同源性，LGALS3為抗凋亡基因；差異條帶16、17和PHF13(finger protein13)

4、基因具有較高的同源性，其功能與卵母細胞成熟過程中的基因轉錄調控和染色質結構的調控有關；差異條帶19和AVEN(Cell death regulator Aven)基因具有較高的同源性，AVEN為抗凋亡基因。標號為19的差異基因（與AVEN基因具有較高的同源性）在卵母細胞成熟前表達，成熟后消失；標號為11和12的差異基因（與SH3GLB1基因具有較高的同源性）、標號為15的差異基因（與LGALS3基因具有較高的同源性）、標號為16和17的