褪黑激素對豬卵母細胞體外發(fā)育的影響.pdf

1、褪黑激素(MT)是一種吲哚類激素，在人及哺乳動物體內(nèi)主要是由松果腺分泌，其他器官和細胞也有少量分泌，分泌量受光照影響比較大，且呈現(xiàn)晝夜節(jié)律性，一般夜晚分泌多，白天分泌少。MT能夠透過細胞膜及各種膜結構進入細胞器來發(fā)揮抗氧化作用。目前MT的抗氧化、抗凋亡作用在小鼠、綿羊、雞等動物卵母細胞體外成熟及早期胚胎中均有報道，但在豬卵母細胞體外成熟中報道較少。本研究以豬為試驗對象，研究了褪黑激素對卵母細胞體外成熟及胚胎發(fā)育的影響。主要內(nèi)容如下:

2、r>　　1褪黑激素對豬卵母細胞體外發(fā)育的影響
　　(1)褪黑激素對豬卵母細胞體外成熟的影響
　　挑選合格的卵母細胞，然后隨機分成6組，在添加褪黑激素(分別為0M、10-11M、10-9M、10-7M、10-5M、10-3M)的體外成熟培養(yǎng)液中培養(yǎng)46h，統(tǒng)計各組卵母細胞的極體排出率。結果發(fā)現(xiàn)，10-9M組(77.54％)和10-7M組(69.2％)的極體率顯著高于對照組(67.81％)和其他試驗組，該兩組之間差異不顯著。

3、r>　　(2)褪黑激素對豬卵母細胞孤雌胚胎發(fā)育的影響
　　挑選合格的卵母細胞置于未添加褪黑激素的體外成熟液中培養(yǎng)46h，接著進行孤雌激活并隨機將卵母細胞放到6組添加褪黑激素(分別為0M、10-11M、10-9M、10-7M、10-5M、10-3M)的胚胎培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。胚胎培養(yǎng)的第2d統(tǒng)計卵裂率，第7d統(tǒng)計囊胚率。結果發(fā)現(xiàn)，褪黑激素未能提高卵母細胞孤雌發(fā)育的卵裂率，對照組和各試驗組間差異不顯著。10-5M組(20.31％)的囊胚

4、率顯著高于對照組(9.45％)和10-3M組(10.68％)。
　　(3)褪黑激素對豬卵母細胞體外發(fā)育的影響
　　成熟液和胚胎培養(yǎng)液分別添加10-9M、10-5M褪黑激素，卵母細胞體外培養(yǎng)46h后統(tǒng)計卵裂率。孤雌激活后繼續(xù)胚胎培養(yǎng)，第2d統(tǒng)計卵裂率，第7d統(tǒng)計囊胚率。結果發(fā)現(xiàn)，對照組和試驗組的卵裂率(77.68％和81.37％)和囊胚率(17.89％和19.27％)差異不顯著，試驗組的極體率(78.03％)顯著高于對照組(6

5、4.55％)。2褪黑激素對豬卵母細胞體外發(fā)育過程中GPx4和Caspase-3表達的影響
　　通過RT-PCR方法鑒定外源性褪黑激素是否影響豬體外胚胎的GPx4和Caspase-3基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達，探尋影響豬體外胚胎發(fā)育的機理。豬卵母細胞體外成熟及孤雌激活后培養(yǎng)基中均添加褪黑激素，收集體外成熟16h、24h、46h的豬卵母細胞以及2-cell、4-cell和囊胚期的孤雌胚胎，RT-PCR方法鑒定以上基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達情況。褪