血管緊張肽Ⅱ?qū)ωi有腔卵泡與卵母細(xì)胞體外發(fā)育的影響.pdf

1、哺乳動(dòng)物卵巢上存在有大量的各級(jí)卵泡，但絕大部分卵泡與卵母細(xì)胞都在發(fā)育的不同階段發(fā)生閉鎖、凋亡和退化，只有極少卵泡能夠最終發(fā)育至成熟并排卵?，F(xiàn)代轉(zhuǎn)基因技術(shù)、核移植技術(shù)等輔助生殖技術(shù)的快速發(fā)展，使得僅僅依靠雌性動(dòng)物自然條件下產(chǎn)生的成熟卵子遠(yuǎn)不能滿足人們對(duì)其數(shù)量的實(shí)際需求。因此，研究有腔卵泡與卵母細(xì)胞的體外發(fā)育，對(duì)于探索充分利用母畜遺傳資源的有效途徑，擴(kuò)大優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞來(lái)源等都具有重要意義。作為重要卵源的卵母細(xì)胞體外成熟技術(shù)目前仍存在一些問題，

2、如卵母細(xì)胞核質(zhì)成熟不同步、受精后發(fā)育能力降低等。血管緊張肽Ⅱ(AngⅡ)是哺乳動(dòng)物卵巢組織中腎素。血管緊張肽系統(tǒng)（RAS）的主要活性物質(zhì)之一，與其特異性受體結(jié)合不僅能夠調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體水鹽代謝、血壓及心血管系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)，在動(dòng)物卵巢中也發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。AngⅡ能夠誘導(dǎo)家兔排卵、調(diào)節(jié)大鼠卵泡顆粒細(xì)胞凋亡及類固醇激素的合成、促進(jìn)牛顆粒細(xì)胞環(huán)加氧酶2(PTGS2)基因的表達(dá)等，但有關(guān)AngⅡ在豬卵巢功能調(diào)節(jié)上的作用少有報(bào)道。本試驗(yàn)旨在研究AngⅡ

3、對(duì)分離培養(yǎng)的豬有腔卵泡及卵母細(xì)胞體外發(fā)育的影響，以期了解AngⅡ的相關(guān)功能作用與機(jī)理，為豬卵泡與卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)的新嘗試提供參考。試驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.分離豬卵巢3～5mm直徑健康、完整有腔卵泡，分為對(duì)照組、10-7mol/LAngⅡ劑量組、10-6mol/LAngⅡ劑量組和10-5mol/LAngⅡ劑量組進(jìn)行卵泡體外培養(yǎng)。分別培養(yǎng)12h和24h后，分離收集各組卵泡顆粒細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)顆粒細(xì)胞凋亡。結(jié)果表明，體外培養(yǎng)豬

4、有腔卵泡12h，添加不同濃度的AngⅡ?qū)︻w粒細(xì)胞凋亡率無(wú)顯著影響(P＞0.05);培養(yǎng)24h，僅10-7mol/LAngⅡ組的早期顆粒細(xì)胞凋亡率明顯升高(P＜0.05)。
　　2.豬3～5mm有腔卵泡分為對(duì)照組和AngⅡ組(10-7mol/L)，體外培養(yǎng)24h后，檢測(cè)兩組卵母細(xì)胞透明帶外徑;FDA染色檢查卵母細(xì)胞存活率。結(jié)果顯示，豬有腔卵泡添加10-7mol/LAngⅡ體外培養(yǎng)24h，對(duì)卵泡卵母細(xì)胞透明帶外徑及卵母細(xì)胞的存活率均無(wú)

5、顯著的影響(P＞0.05);表明添加10-7mol/LAngⅡ并未改善豬完整卵泡的體外發(fā)育狀況。
　　3.從直徑3～5mm健康有腔卵泡分離COC，對(duì)照組和AngⅡ組（10-7mol/L）COC體外培養(yǎng)24h，檢測(cè)兩組卵母細(xì)胞透明帶外徑;FDA染色檢查卵母細(xì)胞存活率。結(jié)果顯示，對(duì)照組和AngⅡ組的卵母細(xì)胞存活率分別為91.30％和93.33％，直徑分別為140.70±2.36μm和138.00±1.09μm，但兩組的卵母細(xì)胞直徑與存

6、活率差異不顯著(P＞0.05)。
　　4.對(duì)照組和AngⅡ（10-7mol/L）組豬COC體外培養(yǎng)44～46h后，檢測(cè)卵母細(xì)胞第一極體(pbI)排出率，統(tǒng)計(jì)卵母細(xì)胞體外成熟率。兩組所獲成熟卵母細(xì)胞分別進(jìn)行體外受精，48h觀察體外受精卵裂率。結(jié)果表明，添加10-7mol/LAngⅡ能較對(duì)照組顯著提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率（72.12％對(duì)82.21％;P＜0.05）和體外受精卵裂率(71.43％對(duì)82.09％;P＜0.05)。