滴中孔培養(yǎng)法研究牛卵泡顆粒細(xì)胞凋亡與卵母細(xì)胞發(fā)育能力的關(guān)系.pdf

1、本文以牛為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，建立了比較完善的滴中孔(WID)培養(yǎng)系統(tǒng)，并應(yīng)用此系統(tǒng)研究了顆粒細(xì)胞凋亡對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育能力、COCs形態(tài)以及卵丘擴(kuò)展的影響，并探討了以卵泡液中游離顆粒細(xì)胞的密度作為一種判定卵母細(xì)胞發(fā)育能力指標(biāo)的可行性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： 1.HE染色結(jié)果與TUNEL染色一致，并且具有簡(jiǎn)便及廉價(jià)等優(yōu)點(diǎn)。 2.培養(yǎng)滴體積和培養(yǎng)密度顯著影響卵母細(xì)胞的成熟質(zhì)量和胚胎體外發(fā)育能力。IVM時(shí)，采用10卵/40μl、25卵/100μl

2、可顯著提高卵母細(xì)胞的成熟質(zhì)量，而培養(yǎng)密度過(guò)大則會(huì)削弱卵母細(xì)胞的成熟質(zhì)量；在培養(yǎng)密度不變的情況下，培養(yǎng)滴體積對(duì)卵母細(xì)胞的成熟質(zhì)量影響不大。IVC時(shí)，采用10胚胎/40μl、20胚胎/40μl、25胚胎/100μl、50胚胎/100μl可顯著提高胚胎體外發(fā)育能力，而培養(yǎng)密度過(guò)小或者過(guò)大則會(huì)影響到胚胎的發(fā)育能力；此外發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)密度不變的情況下，培養(yǎng)滴體積太小會(huì)削弱胚胎的發(fā)育能力。 3.滴中孔培養(yǎng)法與群卵培養(yǎng)法的效果相似，而單卵培養(yǎng)則

3、顯著降低了卵母細(xì)胞的發(fā)育能力。 4.在直徑4-8mm卵泡中，顆粒細(xì)胞凋亡程度對(duì)卵母細(xì)胞的發(fā)育能力有顯著的影響，輕度閉鎖卵泡(凋亡率為10-40％)的卵母細(xì)胞發(fā)育能力顯著高于健康卵泡(凋亡率＜10％)和嚴(yán)重閉鎖卵泡(凋亡率＞40％)；但在直徑2-3mm卵泡中，即使是輕度閉鎖卵泡的卵母細(xì)胞發(fā)育能力也很差。 5.顆粒細(xì)胞的凋亡程度對(duì)COCs形態(tài)和卵丘擴(kuò)展具有顯著影響，尤其當(dāng)?shù)蛲霰壤?0％時(shí)，COCs形態(tài)和卵丘擴(kuò)展程度明顯變差

4、。 6.卵丘擴(kuò)展對(duì)卵母細(xì)胞的發(fā)育具有顯著的影響，隨著卵丘擴(kuò)展程度的增加，卵母細(xì)胞的發(fā)育能力逐漸增強(qiáng)；此外，在卵丘擴(kuò)展程度相同情況下，輕度閉鎖卵泡的卵母細(xì)胞發(fā)育能力最強(qiáng)。 7.卵泡直徑對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育能力有顯著影響，直徑4-8mm卵泡的卵母細(xì)胞發(fā)育能力顯著高于直徑2-3mm卵泡。 8.卵巢的生理狀態(tài)對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育能力具有一定影響，在直徑4-8mm卵泡中，處于卵泡生長(zhǎng)期和黃體中期的卵母細(xì)胞的發(fā)育能力之間差異不顯著，但具