卵泡液中AMH和顆粒細(xì)胞端粒長(zhǎng)度與卵母細(xì)胞成熟度及IVF-ET結(jié)局關(guān)系的探究.pdf

1、背景:世界第一例試管嬰兒于1978年誕生，自此人類輔助生殖技術(shù)(ART)發(fā)展迅速，給眾多不孕癥夫婦帶來希望。但是，體外受精-胚胎移植(IVF-ET)技術(shù)的臨床療效離人們預(yù)期的抱嬰率還有很大差距。
　　卵子和胚胎質(zhì)量是決定ART成功的主要因素，如何準(zhǔn)確高效地評(píng)估卵子和胚胎質(zhì)量一直是胚胎學(xué)家研究的焦點(diǎn)，選擇高質(zhì)量胚胎移植是臨床生殖醫(yī)師面臨的一項(xiàng)難題。目前，臨床上仍通過形態(tài)學(xué)觀察來評(píng)估卵子和胚胎質(zhì)量，但此方法受到實(shí)驗(yàn)室觀察人員的主觀因素

2、影響，不同觀察人員對(duì)卵子和胚胎質(zhì)量的分型可能會(huì)存在一些差異；為了減少因主觀因素所導(dǎo)致的誤差，臨床上通過移植2-3個(gè)優(yōu)質(zhì)胚胎，這導(dǎo)致多胎妊娠的風(fēng)險(xiǎn)及各種不良并發(fā)癥的發(fā)生率大大增加，給患者及家庭帶來身心和經(jīng)濟(jì)的雙重負(fù)擔(dān)。卵泡液可為卵母細(xì)胞生長(zhǎng)、成熟提供各種激素及細(xì)胞因子；卵泡中顆粒細(xì)胞與卵母細(xì)胞之間關(guān)系密切，細(xì)胞間存在縫隙連接，依靠連接蛋白細(xì)胞間相互交換信息、相互促進(jìn)、同步發(fā)育。顆粒細(xì)胞還以內(nèi)分泌的方式對(duì)卵母細(xì)胞的成熟起作用，影響受精甚至胚

3、胎的發(fā)育潛能。在輔助生殖治療進(jìn)程中，集中研究顆粒細(xì)胞及相關(guān)的卵泡液，將有著廣闊的前景，有望對(duì)卵子和胚胎選擇提供一種高效無創(chuàng)的檢測(cè)方式，從而推動(dòng)ART的快速發(fā)展。
　　以往的研究顯示，卵泡中顆粒細(xì)胞的功能狀態(tài)和細(xì)胞因子的水平與卵子的成熟、受精及胚胎質(zhì)量密切相關(guān)。卵母細(xì)胞發(fā)育歷程中，卵泡液中細(xì)胞因子的類別不斷變化，伴隨著卵巢內(nèi)體細(xì)胞增殖?？姑缋展芗に兀ˋMH）由顆粒細(xì)胞分泌，以自分泌及旁分泌機(jī)制調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞和卵泡功能；端粒(telom

4、ere)和端粒酶調(diào)控著細(xì)胞增殖與凋亡的平衡，決定細(xì)胞增殖能力的關(guān)鍵在于端粒長(zhǎng)度的維持。然而目前鮮有關(guān)于人卵泡液中 AMH和顆粒細(xì)胞端粒長(zhǎng)度與卵母細(xì)胞成熟度及IVF-ET助孕結(jié)局關(guān)系的研究，研究AMH與顆粒細(xì)胞端粒間的關(guān)系，探尋延緩端?？s短機(jī)制，進(jìn)而促進(jìn)卵泡發(fā)育。
　　目的:本研究通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）及實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qRT-PCR）檢測(cè)IVF-ET患者卵泡液內(nèi)AMH水平及顆粒細(xì)胞端粒長(zhǎng)度，分析二者與體外受精-胚胎

5、移植中卵母細(xì)胞成熟度和妊娠結(jié)局之間的關(guān)系，探討其對(duì)卵母細(xì)胞質(zhì)量評(píng)估及優(yōu)質(zhì)胚胎選擇的意義。
　　方法:收集2014年10月-2015年3月于鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心因輸卵管因素行IVF-ET治療的不孕癥患者卵泡液（92例），其中81例獲得卵丘顆粒細(xì)胞。采用黃體中期短效長(zhǎng)方案促排卵，經(jīng)陰道超聲引導(dǎo)下穿刺取卵。穿刺時(shí)吸凈每個(gè)卵泡內(nèi)全部卵泡液，每個(gè)的卵泡液分別放置，依據(jù)卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合物形態(tài)評(píng)分，將每位患者相同成熟度卵母細(xì)胞對(duì)應(yīng)

6、的卵泡液集中在一起；采取人工剝離每個(gè)卵母細(xì)胞周圍的部分卵丘顆粒細(xì)胞(CCs)，分別收集，將每位患者成熟度一致的卵母細(xì)胞對(duì)應(yīng)的卵丘顆粒細(xì)胞團(tuán)混合。根據(jù)年齡（低齡：<35歲，高齡：≥35歲）及卵母細(xì)胞成熟度，將對(duì)應(yīng)的卵泡液和CCs分為4組：低齡成熟、未成熟卵母細(xì)胞組，高齡成熟、未成熟卵母細(xì)胞組。用ELISA法測(cè)定各年齡組不同成熟度卵母細(xì)胞其AMH水平，用qRT-PCR檢測(cè)兩年齡組不同成熟度卵母細(xì)胞周圍的CCs端粒情況。追蹤IVF-ET妊娠結(jié)

7、局，并比較兩年齡組妊娠者、未妊娠者的AMH的水平及CCs端粒的情況。
　　結(jié)果:
　　1.低齡、高齡的未成熟卵母細(xì)胞組卵泡液內(nèi)AMH水平都高于低、高齡的成熟組，低齡組中未成熟和成熟卵母細(xì)胞其卵泡液中 AMH比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義、高齡組內(nèi)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在兩不同年齡組中，未妊娠者和妊娠者卵泡液AMH水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.卵泡液中AMH水平和年齡呈負(fù)相關(guān)。
　　3.低齡、高齡的未成熟卵母細(xì)胞組內(nèi)顆粒細(xì)胞端粒

8、長(zhǎng)度均較低齡、高齡的成熟組的短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。低齡組內(nèi)未妊娠者顆粒細(xì)胞端粒長(zhǎng)度較妊娠者短，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高齡組內(nèi)未妊娠者顆粒細(xì)胞端粒長(zhǎng)度較妊娠者短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.顆粒細(xì)胞端粒長(zhǎng)度與年齡呈負(fù)相關(guān)，卵泡液中AMH和顆粒細(xì)胞端粒長(zhǎng)度呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.AMH在成熟、未成熟卵泡中均有表達(dá)，且與年齡呈負(fù)相關(guān)，AMH在一定程度與卵母細(xì)胞成熟度相關(guān)。
　　2.顆粒細(xì)胞端粒長(zhǎng)度與年齡呈負(fù)相關(guān)，