NDRG2在食管鱗癌組織中表達及在體外對食管鱗癌細(xì)胞功能影響的初步研究.pdf

1、食管癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一，其兩種病理類型：食管鱗癌和腺癌，具有不同的病因、病理和地理分布。中國和亞洲地區(qū)高發(fā)的為食管鱗癌。中國食管癌死亡率位居62種腫瘤死因的第四位，是一種極其常見的惡性腫瘤類型。食管癌缺乏早期診斷指標(biāo)，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)多已到達晚期。盡管現(xiàn)在食管癌的治療在手術(shù)、放療、化療方面取得了很大的進步，但是對患者遠(yuǎn)期存活改善仍不容樂觀。因此迫切需要深入揭示食管癌發(fā)生與發(fā)展的分子生物學(xué)機制，闡明決定食管癌惡性生物學(xué)行為的關(guān)鍵基因，

2、提供新的診斷和治療靶點，提高食管癌患者生存率。
　　人NDRG2基因是本校生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室于1999年克隆的一個新基因（GenBankAccessionAF159092），屬于NDR(N·myc-downstreamregulatedgene)家族，與同家族NDRG1基因具有很高的同源性。該基因位于14q11.2，包括16個外顯子和15個內(nèi)含子。該序列編碼357個氨基酸殘基，分子量為40kD的蛋白質(zhì)。
　　前期關(guān)于

3、NDRG2的研究顯示，NDRG2與細(xì)胞生長、分化、凋亡、應(yīng)激反應(yīng)等生理過程有關(guān)。NDRG2在多種腫瘤組織與癌旁或正常組織中存在差異表達。外源性過表達NDRG2，對多種腫瘤細(xì)胞體外增殖具有抑制作用。雖然具體機制目前仍不清楚，但我們推測其可能為一種新的抑癌基因，廣泛調(diào)節(jié)多種腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性。目前，NDRG2基因在食管鱗癌組織中表達及其對食管鱗癌細(xì)胞系生物學(xué)功能的影響在國內(nèi)外尚未見報道。本研究探討了NDRG2分子在食管鱗癌組織中的表達及其

4、對人食管鱗癌細(xì)胞系Eca-109體外增殖和凋亡等生物學(xué)行為的影響，為揭示NDRG2在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用提供實驗基礎(chǔ)。本課題包括兩個部分：首先，用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）方法檢測11例食管癌及其配對癌旁組織中NDRG2表達情況。SP免疫組化方法檢測39例食管癌組織及其配對癌旁組織中NDRG2的表達情況，并對NDRG2表達與患者年齡、性別、食管癌分期、分化、轉(zhuǎn)移等各臨床參數(shù)相關(guān)性做統(tǒng)計學(xué)分析。第二，進一步在體外利用攜帶N

5、DRG2基因的腺病毒載體高效轉(zhuǎn)染人食管鱗癌Eca-109細(xì)胞，通過westernblot和RT-PCR方法分別檢測轉(zhuǎn)染前后食管癌細(xì)胞NDRG2表達變化。通過MTT比色實驗、流式細(xì)胞儀測定的方法分別觀察NDRG2對人食管癌細(xì)胞生長、增殖和凋亡的影響。結(jié)果顯示，11例食管癌組織標(biāo)本中有7例組織存在癌和癌旁的差異表達。食管癌組織石蠟切片中NDRG2表達顯著低于癌旁組織，并且與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和分化程度有關(guān)，而與年齡、性別無關(guān)。腺病毒

6、介導(dǎo)NDRG2感染人食管鱗癌細(xì)胞系Eca-109后，NDRG2的mRNA和蛋白表達水平明顯上調(diào)；MTT生長曲線顯示NDRG2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖受到明顯抑制；流式細(xì)胞儀檢測顯示感染后的Eca-109細(xì)胞G2期細(xì)胞明顯減少（P<0.01），S期細(xì)胞明顯增多（P<0.01）；感染后的Eca-109細(xì)胞中凋亡細(xì)胞明顯增多，感染48h后達16.0％。以上結(jié)果提示NDRG2作為一種抑癌候選基因，與食管鱗癌細(xì)胞分化、增殖及凋亡有關(guān)。NDRG2可能成為食管