鼻咽癌細(xì)胞株X射線照射后耐藥性產(chǎn)生的分子作用機(jī)制.pdf

1、目的：研究腫瘤細(xì)胞接受射線照射后耐藥相關(guān)基因和DNA修復(fù)基因的表達(dá)，探討放療后腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥的機(jī)制，為臨床合理安排腫瘤放化療順序、避免因放療誘導(dǎo)的多藥耐藥，提高腫瘤綜合治療效果提供理論依據(jù)。 方法：選取人系鼻咽癌CNE細(xì)胞株，利用X射線作為照射源對(duì)該細(xì)胞株進(jìn)行照射。細(xì)胞每次接受照射的劑量為2Gy，1次/天，連續(xù)照射5天，照射總劑量為10Gy。每次照射后將細(xì)胞放回CO2孵箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，照射全部結(jié)束后立即收集部分細(xì)胞，其余細(xì)胞

2、繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后每周收集1次，共收集5次(即照射終止后即刻，1-4W)，凍存?zhèn)溆?。光鏡和透射電鏡下觀察照射前后細(xì)胞形態(tài)；采用MTT法檢測(cè)照射后細(xì)胞對(duì)化療藥物順鉑(cDDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)的耐藥性；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布；克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況；RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)和Westernblot方法，檢測(cè)X射線照射前后細(xì)胞株中mdr1、GST-π和p53基因的表達(dá)以及hMSH2、hMLH1、MGMT和

3、XRCC1的表達(dá)，分析各蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性，并對(duì)表達(dá)有變化的基因進(jìn)行測(cè)序。采用SPSS10.0軟件包，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)和Pearson直線相關(guān)檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 1X射線照射誘導(dǎo)CNE細(xì)胞株耐藥蛋白P-gp和GST-π表達(dá)。 2X射線照射誘導(dǎo)CNE細(xì)胞株DNA修復(fù)基因hMSH2和MGMT 的表達(dá)，這可能與照射引起的DNA損傷有關(guān)，并可能增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞照射后產(chǎn)生的多藥耐藥性。