EDAG-1基因在白血病細(xì)胞株中的表達(dá)及意義.pdf

1、安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文EDAG-1基因在白血病細(xì)胞株中的表達(dá)及意義姓名：周穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：汪思應(yīng);陳振東20040401安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文E D A G - I 基因在白血病細(xì)胞株中的表達(dá)及意義碩士研究生：周穎導(dǎo) 師：汪思應(yīng)陳振東楊曉明中文摘要目的： E D A G - I 基因是我們從人4 月齡胎肝組織與成年肝組織的差異表達(dá)基因E S T①x p r e s s e dS 娜n c e T

2、 a g ，表達(dá)序列標(biāo)簽) 庫(kù)中分離得到的一種新基因。本研究通過(guò)對(duì)E D A G - I 在自血病細(xì)胞株中的表達(dá)、有無(wú)轉(zhuǎn)錄活性、是否發(fā)生突變等的檢測(cè)，探討E D A G _ I 基因與白血病的發(fā)病關(guān)系。方法：選用白血病細(xì)胞株共1 5 種，通過(guò)R T - P C R檢測(cè)細(xì)胞株中E D A G - 1 基因的表達(dá)，并回收擴(kuò)增得到的E D A G - I 編碼區(qū)片段，構(gòu)建相應(yīng)的重組質(zhì)粒并測(cè)序分析編碼區(qū)突變情況；利用S o u t h e r

3、nb l o t 檢測(cè)白血病細(xì)胞株中E D A G - I 基因組的重排和擴(kuò)增情況；同時(shí)通過(guò)N o r t h e r nb l o t 和W e s t e r nb l o t 分別確證E D A G - Im R N A 和蛋自在白血病細(xì)胞株中的表達(dá)情況和基因的重排和擴(kuò)增；利用M a m m a l J a n 姒T c H I l A l ( E RT w o - H y b r i d A s s a yK i t 和c A

4、T E n z y Ⅱl eA s s a yS y s t e m分析E D A G 一1 基因的轉(zhuǎn)錄活性：通過(guò)M e r c u r y T M P a m w a y P m m m 喀L u c i f e r a s c S y s t e m檢測(cè)E D A G 一1 在N F K B 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的作用：通過(guò)陰S A 分析高表達(dá)E D A G - I 白血病細(xì)胞系N F - c BD N A 結(jié)合活性的改變。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)紅系

5、( K - 5 6 2 、H E L ) ，巨核系( D A M I 、M E G 一0 1 ) 、T 細(xì)胞白血病細(xì)胞中的J u r k a t 細(xì)胞在m R N A 、蛋白水平均高表達(dá)E D A G —l 基因，淋巴瘤細(xì)胞株R a j i 在m R N A 、蛋白水平略高表達(dá)E D ^ j G - 1 基因。R T —P c R 擴(kuò)增的即A G 一1 基因編碼區(qū)片斷連接到p M I ) - 1 8 T 載體中，并轉(zhuǎn)入J M l 0 9